N-MIDn 骨钙素标准操作程序SOP文件.docx

ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第1页，共4页用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的N-MID骨钙素（osteocalcin）。可用于骨质疏松症或血钙增高症患者作抗再吸收治疗效果的监测。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsysl010和2010免疫测定分析仪。概述：骨钙素是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K,同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。骨钙素产生后一部分吸收进入骨基质，另一部分释放进入外周血。因此，血清（或血浆）中骨钙素的含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。骨钙素含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进以及Paget病等疾病中。目前，骨钙素已被视为骨转换标志物，用于对上述疾病进行抗再吸收治疗效果的监测。完整的骨钙素（氨基酸厂49）及大的NMID片断（氨基酸143）均存在于血液中。完整的骨钙素在外周血中不稳定，翔基端43-44间的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下来的N一MID则稳定得多。Elecsys N-MID骨钙素测定方法采用了针对骨钙素N端片段和N一MID片段上的决定簇的二株单克隆抗体。因此能够检测血清（或血浆）中稳定的NM1D片段和尚未被分解的完整的骨钙素。与不稳定的C端片段（氨基酸4349）没有关系，从而确保在常规实验室条件下获得稳定的检测结果。原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20ml标本、生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗N-MID骨钙素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂:M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度072mgl,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度L5mgl,磷酸缓冲液0.01oll, pH6.0o含防腐剂。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第2页，共4页R2： Ru(bpy)32+化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体(黑盖)，1瓶,10ml,浓度L3mgl,磷酸缓冲液0.lmoll, pH6.0o含防腐剂。储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。开封后，2 8度12周；放在Elecsys2010上,8周；(使用后放回2-8度；如置20-25度，约20小时)。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：Li-肝素、EDTA-K3抗凝。注意：避免溶血，因为血细胞含有的蛋白醵可分解骨钙素。建议立即离心血标本。稳定性：血清或肝素抗凝血浆在15 25度可稳定8小时，2 8度可稳定3天，一20度可稳定3个月。只能冻融一次；EDTA抗凝血浆在15 25度可稳定2天，2 一度可稳定3天，-20度可稳定3个月。只能冻融一次。沉淀的标本使用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。检测步骤：提供的材料：货号：2149133, 100人份的Elecsys N-MID骨钙素试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗N-MID骨钙素抗体 R2三联毗咤钉标记的抗N-MID骨钙素抗体需要的材料(未提供)： Elecsys N-MID骨钙素定标液(N-MID osteocalcin CalSet)货号 1972111 Elecsys 骨标志物质控品(PreciControl Bone) 1, 2和3货号 1972227 Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell)货号 1662988 Elecsys测量池清洗液(CleanCell)货号 1662970 Elecsys清洗添加剂液(SysWash)货号1930346 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 1298500 Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159 Elecsys 2010反应杯(Assay Cup)货号 11706802 Elecsys 2010吸样头(Assay Tip) 货号 11706799ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第3页，共4页方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。定标：每批N-MID骨钙素试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用N-MID骨钙素CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。计算：对每一个标本，仪器会自动计算N-MID骨钙素含量，单位是ng/ml。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素65mgdl）、脂血（脂质1500mgdl）和生物素G00ngml干扰。受溶血干扰，血细胞含有的蛋白酶可分解骨钙素。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2200Uml）。16种常用药物经试验对本测定无干扰。N-MID骨钙素浓度高达4200ngml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。Elecsys N-MID骨钙素测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。检测范围：0.500300ngml文件编号：ABCD-02-38ABCD医院免疫实验室N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第4页，共4页稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:5稀释。稀释后的标本NMID骨钙素含量必须高于60ngl。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。正常参考值：例数N-MID骨钙素第50百分位5-95百分位健康妇女绝经期前20岁绝经期后骨质疏松患者正常男人18-29岁10810212023272711-4315-4613-4830-50岁51-70岁如有必要,18317912540252424-7014-4214-46各实验室应自己测定一个正常值范围。