液相色谱柱维护与使用指南.docx
液相色谱柱维护与使用指南色谱柱是整个液相分离系统的核心，而色谱柱的安装，活化/平衡，使用，维护/清洗以及保存是发挥色谱柱性能的重要过程。笔者收集了Waters,Phenomenex,纳谱分析（国产）以及安捷伦的液相色谱柱使用指南。笔者综合几家的使用指南，总结如下：1 .安装现代色谱柱上一般都会标明流向，我们应该按照流向进行正确安装,后期也许可以进行反冲,但前期还是尽量不要反冲。当安装新色谱柱时，必须确保连接管路与新色谱柱匹配。如果色谱柱末端与系统接头匹配不佳，新色谱柱的性能会受到不良影响（诸如：柱效下降、峰形拖尾等）或者发生渗漏。同时色谱柱的接头应照最大压力进行选择，如下图为安捷伦推荐的接头。最大系统压力推荐的接头部件号最高400barInfmity1abQuickTurn接头（手紧式）接头：5067-5966最高800barInfmity1abQuickTurn接头（带有安装工具）接头：5067-5966安装工具：5043-0915最高1300barInfinity1abQuickConnect快速连接接头接头：5067-5965如需了解更多信息和部件号，请参见Agi1entInfinity1ab接头产品样本（5991-5164CHCN）。Infinity1abQuickConnect快速连接组件,部件号5067-5961QuickTurn接头，部件号5067-59次:C喝小知识2 .活化/平衡通常，色谱柱出厂时保存于100%乙精中。将色谱柱更换至其它流动相体系之前，务必要确保流动相的兼容性。为避免流动相缓冲液在色谱柱或色谱系统中析出，使用五倍柱体积的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱，其中有机溶剂含量与所需缓冲盐流动相的有机溶剂含量相同或更低（例如，使用60%的甲醇水溶液冲洗色谱柱和系统，然后再更换为60%甲醇/40%缓冲液的流动相）。对于反相分离来说，完成平衡至少用10倍柱体积的流动相（参见下表中的色谱柱体积）。当反压达到恒定且色谱柱基线稳定时，可认为该柱达到完全平衡。对于具有较短的化学链（例如C8、苯基、CN）固定相的色谱柱，应小心确保在使用色谱柱之前对其进行了彻底的平衡。这样可确保重复性，并有助于防止保留时间漂移。色造柱内径!柱长（mm）1.0mm2.1mm3.0mm4.6mm300.0240.100.210.50500.0390.170.350.83750.0590.260.531.251000.0790.350.711.661500.120.531.072.49250/0.871.8一馆都贲1色漕柱体积表（m1）3 .使用每个色谱柱都会标明操作压力/pH值，我们在使用过程中不应超过此压力/pH值，否则可能会降低色谱柱性能。柱温升高，系统压力也会降低，但也不能为了降低系统压力，而过分提高柱温。虽然反冲一般不会损坏色谱柱，但还是应避免，除非是在尝试去除柱前筛板堵塞物时。始终使用高纯度试剂和色谱级溶剂来准备流动相，水尽可能使用超纯水或者屈臣氏/娃哈哈的纯净水。在使用之前对所有流动相进行脱气和过滤。同时应经常边瓶一起更换，不要往瓶内添加有机相。流动相添加剂也尽量选择高纯度的，避免使用分析纯或者化学纯的添加剂。当流动相中盐浓度很高时，需要考虑高比例有机相时，盐是否会有析出，从而可能导致色谱柱发生堵塞。建议使用预柱/筛板来保护色谱柱并延长其使用寿命。如WaterS推荐：在系统管路中使用在线过滤器，筛板规格至少为0.5m或最好为0.2m<5确认色谱柱是否耐受100%的水相,如普通C18柱在Io0%水相的情况下,可能会发生柱塌陷。Waters色谱柱的保护柱及在线过滤器4 .维护/清洁色谱柱峰形发生改变、色谱峰分叉、出现肩峰、保留时间漂移、分离度变化或背压升高，都表明色谱柱被污染了。用纯有机溶剂进行冲洗以去除非极性污染物，谨慎操作以避免任何缓冲盐的析出。如果冲洗不能解决问题，可采用以下骤对色谱柱进行清洗和再生。1 .断开色谱柱与检测器/质谱的连接，然后把柱接到废液杯中；2 .从你所使用的流动相开始清洗（但必须去除缓冲盐）。按10到20色谱柱体积量注入。为获得理想结果，建议以低流速（正常分析流速的25%50%）进行反冲。3 .下一步，使用100%有机相（甲醇或乙胎）。4 .检查压力，以查看压力是否返回到正常状态，如果没有返回到正常状态，则进行以下步骤。5 .丢弃色谱柱或使用更强的条件，例如75%乙晴/25%异丙醇。6 .提高到100%异丙醇、100%二氯甲烷或100%己烷（如果使用二氯甲烷或己烷，则需要使用异丙醇冲洗色谱柱，然后才能使用并返回到反相流动相）。对于H1IJC柱，清洁方法则不同，比如：HI1ICKinetexHI1IC色谱柱以10至20倍柱体积的下列溶剂冲洗：1）95%水/5%乙懵（去除缓冲盐）2） 95%IoomM醋酸钱，pH5.8/5%乙盾3） 95%水/5%乙月青4）流动相平衡5.保存硅胶基质键合相色谱柱应在纯有机溶剂（例如乙月青）中进行长期存放。如果色谱柱己使用了含缓冲盐的流动相，应首先使用甲醇或乙月青和水的50:50混合物对色谱柱进行20至30个色谱柱体积的冲洗，然后使用纯溶剂进行20至30个色谱柱体积的冲洗。在存放之前，应使用堵头堵住接头，以防止填充物变干。将色谱柱放在大多数流动相中可安全存放较短时间。为了保护设备，需要使用不含缓冲液的相同的流动相对色谱柱进行冲洗，以从仪器和色谱柱中去除盐分（例如，使用60:40ACN/H20去除60:40ACN/0.02M磷酸盐缓冲的流动相）。在使用此方法时，可使用原始流动相快速进行重新平衡，并消除了被盐分腐蚀的危险。如需将色谱柱放置超过四天，应将其保存于100%乙月青中。对于高温条件下的分离，应在使用后立即保存于100%乙晴中，切勿将色谱柱保存于缓冲液中。如果流动相中含有缓冲盐，则先用10倍柱体积95%纯水冲洗色谱柱（有关色谱柱体积信息，请参见前表）用以彻底清除柱内的盐成分，再梯度洗脱至纯有机相，并用10倍柱体积的有机相冲洗柱。将色谱柱完全密封，防止溶剂蒸发而导致柱床变干。【参考资料】：本次内容主要参考了Waters、PhenOmeneX以及安捷伦的色谱柱使用指南。
