病毒检测记录.docx

病毒检测记录编号：F-S0P-Z1008-01页码：13版本号：O1修订号：00机密等级：秘密批号送检日期检测日期试验类型口初试口复试口重试重（复）试原因初试不合格，初试不成立，口稳定性检验检定依据：中华人民共和国药典现行版检定方法：见病毒检测SOPS0P-Z1008-01一、设备/用具设备名称编号是否完好确认人生物安全柜是口否口倒置显微镜是口否口倒置荧光显微镜,1二否口37C02孵箱是口否口用具名称灭菌日期有效期至灭菌2m1吸管灭菌Ion1I吸管细胞培养瓶细胞培养板二、试剂试剂名称批号生产厂家有效期至胰酶MEM培养基免疫荧光试剂试剂盒名称制备日期来源有效期至0.5%鸡和豚鼠红细胞悬液（现用现配）三、检测用细胞细胞名称制备批号代数来源细胞形态（:正常；X：异常）确认人MRC-5VEROMDBKBT四、操作程序1细胞病变检查(1)样品制备：取m1待检血清加入m1的MEM细胞培养液中；再取m阴性血清加入m1'IEM细胞培养液中。(2)接种细胞：将准备好的二倍体细胞、Vero细胞、牛肾细胞、BT细胞消化后，种入75c细胞瓶中，加入上述培养液(含15%待检样品和阴性血清的培养液)，每种细胞接种瓶，每瓶加液体m1,于37C培养天。第天换液一次。(3)盲传：第一天进行第一次盲传，将上述接种供试品的四种细胞和阴性对照，分别传出个75cm2细胞瓶，继续培养天,在第天时换液一次。(4)第二次盲传：第天时进行第二次盲传，将第一次传代后的细胞培养物分别传至孔细胞培养板中，每种细胞接种孔。其中孔加入已处理好的盖玻片。继续培养至第21天。剩余细胞保存备用。(5)阴、阳性对照制备：第天阴性对照瓶细胞达到70%汇合时，取VerO和BT细胞种入含盖玻片的12孔板中，置37°C5%C02培养箱中，次日，Reo3和PI3种入VerO细胞，每种病毒种5孔，留2孔做阴性对照。BVDV.BPV>BAV-3接种于BT细胞中，每种病毒种3孔，留3孔做阴性对照。置375%C02培养箱中，吸附至,弃去上清液，加入细胞维持液，继续培养7天。(6)接种观察记录日期：年月日数细Q第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天MRC-5VeroBTMDBK第一次盲传观察记录日期：年上.日数细第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天MRC-5VeroBTMDBK第二次盲传训,察记录日期：年_月_一日数第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天MRC-5VeroBTMDBK2血吸附病毒检查：.培养天后，将上述接种供试品的每种细胞取孔，接种了BPI3的Vero细胞取孔，未接种病毒的VerO细胞取孔，用%的鸡和豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面，放置至o然后置C至,分别进行镜检，观察红细胞吸附情况。3、免疫荧光抗体检查法(D取第二次盲传后的供试品飞片，每种细胞取2片。接种了病毒的阳性对照片，每种取2片。(2)用PBS(0.01MpH7.4)反复冲洗三次，自然晾干或吹干，用冷丙酮在室温条件下固定至至,用PBS反复冲洗数次，去离子冲洗一次，自然晾干或吹干。(3)滴加标记了荧光素的牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、牛副流感病毒单克隆抗体的直接荧光抗体，置密闭湿盒中37作用至,取出飞片，弃去荧光抗体，用PBS反复冲洗数次，去离子水冲洗一次，自然干燥或吹干。(4)荧光显微镜下观察。荧光显微镜下观察，细胞核和细胞浆不显示任何荧光灶，结果为阴性。五t结果判定：1、阴性对照应无细胞病变，血吸附检查为阴性，荧光抗体检查为阴性；阳性对照有明显的细胞病变；血吸附检查为阳性，荧光抗体检查为阳性，判为试验成立。若供试品无细胞病变、血吸附检查为阴性，且荧光抗体检查为阴性判定为符合要求。供试品如出现细胞病变，或血吸附检查为阳性，或任何种荧光抗体为阳性则判定为不符合要求。六、结果：阳性：“+”阴性：“一”供试品细胞病变观察血吸附检查MRC-5VEROMBDKBT阴对VEROMBDKBT阳对阴对供试品免疫荧光检查阳性对照BVDVBAV3BPVRE03BP13BVDVBAV3BPVRE03BP13七、结论：检测者：复核者: