血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定作业指导书.docx
血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定作业指导书1 .实验原理：国际临床化学学会（IFCC）推荐的紫外连续监测法。1-天门冬氨酸+a-酮戊二酸AST草酰乙酸+1-谷氨酸草酰乙酸+NADH+H.M梁，I吁装果及+NAD'+HQ2 .标本：2.1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：3天内的活性损失：28保存：8%；1525°C保存：10%；标本稳定性：-20°C保存至少可稳定3个月。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂：甲能AST测定试剂盒（货号：141260171701试剂1：6×64m1;试剂2：6X16m1）6.1.1试剂组成试剂1（R1）：TriS缓冲液pH7.81-天门冬氨酸MDH（苹果酸脱氢酶）1DH（乳酸脱氢酶）试剂2（R2）：a-酮戊二酸80mmo11240mmo112600U/1600U112mmo11NADH磷酸比哆醛试剂：Good,s缓冲液pH9.6磷酸毗哆醛0.18mmo110.7mmo110.09mmo116.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂己变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g1）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSyS公司提供的TruCa1U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6 .3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU1OOO生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AUIOoO生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AUIOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCaIU复合校准品AST校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行AST活力检测，可以直接使用A/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算A1T活力的计算因子见下表：AA/minX因子=AST活力U/1底物起始的反应（37°C）样品起始的反应（37）340nm21431745334nm21841780365nm3971323512.参考值范围141不含磷酸毗哆醛含磷酸毗哆醛女性<31U11035U1男性<37U11050U1参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义【2】丙氨酸氨基转移酶（A1T）旧称谷丙转氨酶（GPT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）IH称谷草转氨酶（GOT）o它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给a-酮酸的反应。A1T是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行A1T和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/A1T比率可用于肝病的鉴别诊断。比率1预示中度的肝损伤；比率1和严重肝病有关，常见慢性肝病。14 .操作性能14.1线性范围2-800U1o14.2精密度：精密度的评估是根据NCC1S推荐的标准方法，AUIOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1S的规则。不含磷酸吐哆醛批内精密度n=20X(U/1)S(U/1)CV(%)天间精密度n=20X(U/1)S(U/1)CV(%).样品125.10.823.25样品125.71.134.40样品251.31.573.06样品248.60.671.38样品31160.900.77样品31150.800.69含磷酸毗哆醛批内精密度n=20X(U/1)S(U/1)CV(%)天间精密度n=20X(U/1)S(U/1)CV(%)样品143.61.102.51样品144.01.593.61样品274.51.792.41样品277.03.053.97样品31743.181.83样品31873.371.8014.3方法学比较：不含磷酸毗哆醛本公司不含磷酸毗哆醛的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对78个样品进行AST活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98-0.51U/1；r=0.999。含磷酸毗哆醛本公司含磷酸毗哆醛的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对80个样品进行AST活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97-0.79U/1；r=0.995。14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/1。14.5病人结果可报告范围2-800U1o15 .超出范围结果处理：本法对AST活力检测的最大A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。16 .病危报警值的处理无。17 .方法局限性17 .1本法对AST活力检测的最大A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。18 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mo11,胆红素浓度684mo11,甘油三酯浓度22.6mmo11时没有观察到干扰。红细胞内富含AST,因此溶血血清检测结果明显偏io18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献：1. Thomas1.A1anineaminotransferase(A1T),Aspartateaminotransferase(AST).In：Thomas1,editor.C1inica11aboratoryDiagnostics.ed.Frankfurt：TH-BooksVer1agsgese11schaft;1998.p.55-65.2. MossDW,HendersonAR.C1inica1enzymo1ogy.In：BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofC1inica1Chemistry.3"ed.Phi1ade1phia：W.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.3. BergmeyerHU,HorderM,RejR.Internationa1FederationofC1inica1Chemistry(IFCC)ScientificCommittee,Ana1ytica1section：approvedrecommendation(1985)onIFCCmethodsforthemeasurementofcata1yticconcentrationofenzymes.Part3.IFCCmethodfora1anineaminotransferase(1-a1anine：2-oxog1utarateaminotransferase,EC2.6.1.2).JC1inChemC1inBiochem1986;24：48195.4. 1orentzK,Roh1eG,Siekmann1.EinfuhrungderneuenStandardmethoden1994zurBestimmungderRata1ytischenEnzymkonzentrationenbei370C.DGK1inischeChcmieMitteiIungen1995;26：190220.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
