血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定.docx
血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定1. 实验原理德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法。1DH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD.还原为NADH,NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。1-乳酸+NAD*丙酮酸+NADH+H'1DH2. 标本：A3. 1病人准备：无特殊。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3 .标本存放：3天内的活性损失：28保存：8%；1525保存：2%4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6 .实验材料6. 1试剂中能1DH测定试剂盒(14132071701试剂1(6×64m1),试齐IJ2(6×16m1)6.1.1试剂组成试剂1(R1)：N-甲基-右旋糖酊缓冲液325mmo111-乳酸50mmo1/1试剂2(R2)：NAD*10mmo116.1.2试剂准备试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存,试剂保存于28C,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项试剂中含叠氮钠(0.95g1)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品使用DiaSys公司提供的TruCa1IJ校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6 .3质控品具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AUIoOO生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见AUIOoo生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU1OOO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCaIU复合校准品1DH校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行1DH活力检测，可以直接使用A/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算1DH活力的计算因子见下表：A/minX因子底物起始的反应=1DH活力(37)U/1样品起始的反应（37°C）340nm100808095334nm102758250365nm187651500012.参考值范围11U/1女性男性成人：135215135-225儿童：130天14576512573531天1年190420170-45013岁16539515534546岁13534515534579岁14028014530010-12岁12026012032513-15岁100275120-2901618岁105230105-235参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义乳酸脱氢酶（1DH）由五种不同的同工酶组成，催化1-乳酸与丙酮酸的相互转换。1DH存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多种病理情况下出现U）H活力的升高，如心肌梗死、癌症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于1DH缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作1DH同工酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶。14 .操作性能14. 1线性范围：5-1200U1<.14.2精密度：精密度的评估是根据NCC1S推荐的标准方法，AU1OOO批内精密度小于3%,总精密度小于3缸用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1S的规则。批内精密度n=20X(U/1)S(U/1).CV(%)批间精密度n=20X(U/1)S(U/1)CV(%)样品11782.001.12样品11701.620.95样品21872.121.14样品21762.481.41样品35662.270.40样品35663.610.6414.3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与IFCC参考方法（x）,同时对79个样品进行1DH检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x+5.9U/1；r=0.997。14.4灵敏度：本试剂的检测限为5U/1。14.5病人结果可报告范围：5-1200U1o15 .超出范围结果处理本法对1DH活力检测的最大A/min在340、334nm为0.15,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。16 .病危报警值的处理17 .方法局限性17 .1本法对1DH活力检测的最大A/min在340、334nm为0.15,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。18 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mo11,胆红素浓度684mo1/1,甘油三酯浓度22.6mmo11时没有观察到干扰。血红蛋白浓度20.5g1会影响检测结果。19 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 .参考文献1. Thomas1,editor.C1inica11aboratorydiagnostics,1s,ed.Frankfurt:TH-BooksVer1agsgese11schaft;1998.p.89-94.2. MossDW,HendersonAR.Digestiveenzymesofpancreaticorigin.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofc1inica1chemistry.3,ded.PhiIade1phia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617721.3. DeutscheGese11schaftfurK1inischeChemie.（GermanSocietyforC1inica1Chemistry）.Recommendationforthedeterminationofthecata1yticconcentrationof1actatedehydrogenaseat37°C.EurJC1inChemC1inBiochem1993;31:8979.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
