血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法.docx
血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法1 .实验原理以往高密度脂蛋白胆固静的测定采用沉淀法凶。本试剂盒采用第三代均相法，不必离心步骤即可检测高密度脂蛋白胆固醇。使用抗人脂蛋白抗体与低密度脂蛋白（1D1）,极低密度脂蛋白（V1D1）和乳糜微粒形成抗原抗体复合物，只有剩下的高密度脂蛋白胆固醇可以被胆固醇酶法试剂检测1D1,V1D1,乳糜微粒抗人P-脂蛋白抗体抗原抗体复合物+HD1HD1-C+H2O+O2"一4-胆'笛烯酮+脂肪酸+H2O2CHE&CHOH2O2+F-DAOS+4-氨特安营比林P南色复合物+H2O注：F-DAOS为N-乙基-N-（2-羟基-3-丙磺基）-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺2 .标本：2 .1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清，肝素抗凝血浆。3 .标本存放：稳定性：46保存可稳定4天；-20保存至少可稳定2周。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂申能HD1-C测定试剂盒（货号：141352171701试剂16X64m1+试剂26×16m1）6.1.1试剂组成试剂1（R1）：Good,S缓冲液pH7.026mmo114-氨基安替比林0.60mmo11过氧化物酶（POD）1600U1抗坏血酸氧化酶1800U1羊抗人b-脂蛋白抗体适量试剂2（R2）：Good,S缓冲液pH7.026mmo1/1胆固醇酯酶（CHE）800U/1胆固醇氧化酶（CHO）4000U/1F-DAOS0.16mmo116.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g1）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂1.2 校准品：使用DiaSyS公司提供的TrUCaIHD1/1D1校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。1.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AUIOOO生化分析仪8 .操作步骤8. 1项目基本参数：参见AUIooO生化分析仪项目测定参数.SOP文件9. 2仪器操作步骤：参见AU1OoO生化分析仪操作规程.SOP文件10. 验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCa1HD1/1D1校准品HD1-C校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12 .参考值范围：0.9mmo11o参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义门：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸收，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HD1）,低密度脂蛋白（1D1）,极低密度脂蛋白（V1D1）和乳糜微粒。1D1参与将胆固醇运送至外周细胞，而HD1负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（1D1-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病（CHD）以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，1D1Y浓度的升高也预示了高度危险。HD1-C具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HD1-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固静的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HD1-C和1D1-C检测。近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗（特别他汀类药物HMGCOA还原酶抑制剂）临床试验，说明了降低总胆固静和1D1-C水平可极大地减少CHD的危险。流行病学研究观测到男性HD1-C浓度小于O.9mmo11女性小于1.0mmo11,又出现空腹甘油三酯浓度大于2mmo11时，预示冠心病的高度危险。14 .操作性能14.1线性范围：0.03-4.7mmo1114. 2精密度：精密度的评估是根据NCC1S推荐的标准方法，AUIOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1S的规则。批内精密度n=20X(mmo11)S(mmo11)CV(%)批间精密度n=20X(mmo11)S(mmo11)CV(%)样品10.530.0040.81样品11.140.0211.88样品21.450.0100.73样品33.230.0260.8214.3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对60个样品进行HD1-C检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x+0.03mmo11;r=0.994.14 .4灵敏度：本试剂的检测限为0.03mmo11.15 .5病人结果可报告范围：0.03-4.7mmo11.16 .超出范围结果处理：本试剂盒对高密度脂蛋白胆固醇检测范围为0.034.7mmo1J当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+2稀释，重新测定，结果乘以3。17 .病危报警值的处理：无。18 .方法局限性17.1本试剂盒对高密度脂蛋白胆固醇检测范围限为4.7mmo11o当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1氯化钠溶液作1+2稀释，重新测定，结果乘以3。17 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度2840mo11,胆红素浓度684mo11,血红蛋白浓度5.00g1,甘油三酯浓度13.6mmo11时没有观察到干扰。18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. RifaiN,BachorikPS,A1bersJJ.1ipids,1Ipoproteinsandapo1ipoproteins.In:BurtisCA,AshwoodER,editors.TietzTextbookofC1inica1Chemistry.3rded.PhiIade1phia:W.B.SaundersCompany;1999.P.809-61.2. RecommendationoftheSecondJointTaskForceofEuropeanandotherSocietiesonCoronaryPrevention.Preventionofcoronaryheartdiseaseinc1inica1practice.EurHeartJ1998;19:1434-503.3. WiebeDA,WarnickGR.Measurementofhigh-density1Ipoproteincho1estero1.In:RifaiN,WarnickGR,DominiczakMH,eds.Handbookof1ipoproteintesting.Washington:CCPress,1997:127-44.4. NauckM,MaerzW,Wie1andH.Newimmunoseparation-basehomogenousassayforHD1-cho1estero1comparedwiththreehomogenousandtwoheterogeneousmethodsforHD1-cho1estero1.C1inChem1998;44:1443-51.5. SchaeferEJ,McNamaraJ.Overviewofthediagnosisandtreatmentof1ipiddisorder.InRifaiN,WarnickGR,DominiczakMH,eds.Handbookof1ipoproteintesting.Washington:AACCPress,1997:25-4820.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
