河医大生药学实验指导21石蜡切片法.docx

附录五石蜡切片法一、取材与固定：将新鲜材料切成适当大小，一般以不超过0.5Imm3为宜。材料切好后，立即投入固定液中,固定的目的是使植物组织很快被杀死，以保持其生科学研究时状态。固定的时间须视材料而定，常用的固定液为F.A.A固定液。干燥材料不需要固定，可用水或甘油浸软后，切成小块即行脱水。二、冲洗：材料经固定后，必须充分除去固定液，可以流动冲洗或以清水换洗数次，使固定液全部除净。三、脱水：一般用乙醇脱水，每次调换乙醇浓度的时间视材料而定材料坚硬者每隔3小时为宜。乙醇浓度通常为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%（二次）。四、透明：二甲苯为透明剂。一般将二甲苯用无水乙醇配成25%、50%、75%的浓度至纯二甲苯，23小时更换一次,至材料透明为止。五、浸蜡：材料脱水至二甲苯时，可加少量石蜡；以后再逐渐增加熔融石蜡至全部为石蜡浸透止，此操作须在熔蜡炉或恒温箱中进行，一般温度以较石蜡溶点高24。C为宜，约3小时调蜡一次。六、包埋：将烧融石蜡倒在小纸盒（或气埋模子）内，立即将已浸透石蜡的材料放在纸盒中央排列好位置，待石蜡渐泠凝成块状，或石蜡表面冷凝时，即抽入水中，使其迅速冷却成硬块。七、切片：将包埋的石蜡块切成四方形或略长方形，材料在中央，其四周边距离相等而平整，将下端用蜡粘于金属固定器或木块上使之牢固。夹木块于旋转切片机上，另将刀装妥,并夹紧，然后刀口与蜡块接近，再调节厚度（一般为105m）,切片，将切下的蜡片，置于切片盘中。八、贴片：取蛋白粘贴剂少许，置于洁净的玻片上，均匀涂沫后，加蒸储水一滴，将蜡片的光滑面置于玻片上，移至烘片台上，待蜡片伸展平直后，倒去多余的水，烘干。九、溶蜡：将烘干的玻片置于二甲苯中，溶去石蜡，数分钟后，移入二甲苯与无水乙醇的等量混合液中，再移入无水醇中，各需数分钟。十、染色：材料复水至与染色液浓度相等时可染色，常用番红亮绿染色，染色时间须视染色液和材料而定，染色过程在染色缸中进行。十一、脱水与封藏：依次加乙醇、无水乙醇、二甲苯脱水至切片透明清晰为止。然后加加拿大树胶12滴于切片上，小心盖上盖玻片。在载玻片左方贴上标签，注明切片名称,切面和日期即可。附1:F.A.A固定液的配置50%或70%乙醇90m1冰醋酸5m140%甲醛5m1附2:蛋白粘剂的配制新鲜鸡蛋白25m1甘油25m1水杨酸钠0.5g