腺病毒产品使用说明书.docx

腺病毒产品使用说明书1特别提示（非常重要）1 .收到病毒产品后，请将病毒液于-80。C环境中保存（若存放于4。（:请于一周内用完）；2 .如需多次使用，请分装后存放，避免反复冻融，以免病毒滴度降低；3 .所有涉及病毒的实验操作应在BS12级生物安全柜中进行；4 .实验操作过程中需要佩戴一次性帽子、口罩、手套及专门的实验服，避免身体尤其是脸部甚至伤口接触到病毒本身；5 .所有接触病毒的物品均需彻底消毒后统一回收转交于有资质的废弃物处理公司处理，常用的消毒方式有84消毒液或高压灭菌；令本产品仅限于实验室研究使用禁止应用于临床实验！4.产品说明腺病毒产品是以腺病毒为原型进行基因功能改造而成的，无外壳的双链DNA病毒，病毒载体转基因效率高,可以感染不同类型的人和动物组织细胞，不受靶细胞是否为分裂细胞所限，进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。利用腺病毒可以研究Promoter的调控、过表达或者沉默特定基因等。3实验操作步骤1 .在感染前12-18h,将目的细胞种植在孑饭中；注意：不同类型的细胞生长速度有所差异，为保证有较好的实验结果，建议细胞感染时融合率在50%左右。2 .从-80°C冰箱取出病毒，放冰上或4。C融化,待完全融化后使用台式离机低速离心20秒（使病毒完全悬于离心管底部即可）。3 .根据目的细胞MOI值、感染时细胞数量及病毒滴度计算病毒加入量。可以用培养基或PBS对高滴度病毒进行稀释，并尽可能保证所获得的含有腺病毒的培养基的总体积为最小体积，以期获得最佳的感染效率。4 .病毒加入后划"十"字方向轻轻摇匀，使病毒均匀分布于细胞表面，放回培养箱孵育。5 .培养8h-12h后观察细胞状态。如果细胞状态不佳（如：背景比较脏或出现非污染性絮状物等）,则立即将感染培养基更换为新鲜培养基；如果细胞状态与未感染组无明显差异，可继续培养。6 .病毒感染细胞24h后，在步骤5中未进行更换培养基处理，此时需要更换新鲜培养；7 .病毒感染细胞48h-72h后，进行感染效率检测、基因表达检测或干扰效率检测等相关实验。腺病毒感染细胞效果图片