蔗糖磷酸合成酶SucrosephosphatesynthaseSPS试剂盒说明书.docx

蔗糖磷酸合成酶(Sucrosephosphatesynthase,SPS)试剂盒说明书微量法100管748样注意:正式测定管前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定渊定意义：蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS(EC2.4.1.14)以果糖6磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。渊定原理：蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。需自备的的仪藉和用品：可见分光光度计/酷标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/为孔板、研钵、冰试剂的组成和配制：提取液：液体IOom1X1瓶，4C保存；试剂一：液体2.5m1x1瓶，-20C保存；试剂二：1000gm1蔗糖溶液IOm1X1瓶，4C保存；试剂三：液体2m1x1瓶，4C保存试剂四：液体25m1×1瓶，4保存；试剂五：液体6m1x1瓶，4避光保存；样品涌定的准备：按照组织质量(g)：提取液体积(m1)为1：510的比例(建议称取约0.1g组织，加入Im1提取液)，进行冰浴匀浆"8000g4C离心IOmin,取上清，置冰上待测。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm,蒸饱水调零。2、样本测定，(在EP管中依次加入下列试剂)：试剂名称(1)测定管对照管标准管空白管样本1010蒸馀水454555试剂二10试剂一45混匀，25'C准确水浴Iomin试剂三15151515沸水浴中煮沸Iomin左右(盖紧，以防止水分散失)，冷却试剂四210210210210试剂五60606060混匀，沸水浴30min,冷却后，取2001至微量石英比色皿或96孔板中，48Onm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。SPS活力单位的计算：1、按照蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1g蔗糖定义为一个酶活力单位。SPS活性（gminmgprot）=C标准管xVx（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）汽VIXCPrHT=IOOX（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）Xr2、按照样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟催化产生1g蔗糖定义为一个酶活力单位。SPS活性（gming鲜重）=C标准管XVIX（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷（WxV1÷V2）=100x（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）:WC标准管：标准管浓度，1000gm1;VI：加入反应体系中样本体积，0.01m1；V2：加入提取液体积，1m1；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/m1；W：样本鲜重，g；T：反应时间：1Omin0优利科（上海）生命科学再限X