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    猪瘟病毒抗体ELISA检测方法.docx

    • 资源ID:442658       资源大小:16.66KB        全文页数:3页
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    猪瘟病毒抗体ELISA检测方法.docx

    猪瘟病毒抗体E1ISA检测方法原理猪瘟病毒(CSFV)E1ISA抗体检测试剂盒,酶标板包被猪瘟病毒E2抗原(gp55蛋白),如果待检样品中含有猪瘟抗体,与其包被的抗原结合后,将阻断HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被的抗原结合后,将阻断的HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被抗原的结合,从而减少显色反应。试剂IX洗涤液:10X洗涤缓冲液用蒸偏水稀释10倍配成IX洗涤液、TMB底物液。设备耗材单道微量移液器和吸头、计时器、加样槽、蒸储水、酶标仪(450nm)Q操作步骤1试剂盒内所有组份取出,在恒温箱(25+3。C)中放置至少60分钟,恢复至室温,打开铝箔袋取出抗原包被板。2 .在稀释板中加入701样品稀释液,各孔加入70U1血清样品。同样比例稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC),充分混匀。于抗原包被板孔中分别加入IOOU1稀释后的样品以及IOOU1稀释后阴性对照血清(NC)和阳性对照血清(PC)o盖上封板膜,室温(25±3。C)下孵育60分钟。3 .洗板,弃去孔中液体,每孔加300U11倍洗涤液,洗涤3次。最后一次洗涤后将酶标版在吸水纸上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。每孔加入IOoU1CSFVE2HRP标记抗体。盖上封板膜,室温(25±3。C)下孵育30分钟。4 .重复步骤1、2、3o5 .每孔加入1001TMB底物液。6 .盖上封板膜,室温(25±3°C)下孵育15分钟。每孔加入501终止液,终止酶促反应。使用45Onm波长测量吸光度值。7 .结果判定与计算。用酶标仪测定0D450nm0结果判读1 .阴性对照(Ne)OD45Omin平均值0.7;阳性对照(PC)P1平均值50沆2 .计算公式通过下面公式计算样品竞争值觥PD。PI(阻断百分率)=(NCOD均值-样品OD值)÷NCOD均值×100%如果结果可疑,检查样品(是否被细菌污染等)并再次检测。如果再次检测后结果仍可疑,检查农场的流行病学情况并再次收集样品重新检测。PI值40%<40%判定阳性阴性注意事项1 .请勿使用过期的试剂。2 .不同批次的试剂盒试剂请勿混用。3 .小心避免污染试剂盒的组分。4 .检测仪器设备等(移液器、吸头、恒温箱、洗板机和酶标仪)是否可以正常使用。5 .每一次加样品前请更换移液器吸头。6 .使用试剂时注意避免接触皮肤和粘膜,所有在诊断检测中用到的原材料应当进行无害化处理。7 .试剂盒的所有试剂在使用前必须在室温25±3。C平衡30分钟。8 .每个加样槽对应一种试剂,请勿重复使用。9 .所有试剂储存在28(。使用前恢复至室温,使用后再冷藏保存。

    注意事项

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