输血科直接抗人球蛋白试验操作规程.docx

类别：操作规程生效日期：2014. 11部门：输血科修改日期：2014. 10名 称：直接抗人球蛋白试验操作规程新 增:29直接抗人球蛋白试验操作规程【目的】检查体内致敏红细胞。【范围】可疑新生儿溶血病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血以及药物诱导的贫血患者的血液标本。【原理】抗球蛋白试验(AGT)又称Coombs试验，是测定结合在红细胞上的抗体和/或补体的主要方法。抗体分子和补体成份都是球蛋白。用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞，抗人球蛋白试剂可以和致敏在红细胞上的人球蛋白反映，通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集,呈现阳性反应。直接Coombs试验用于检测体内已被抗体或补体致敏的红细胞，可用于新生儿溶血病的诊断，自身免疫性溶血性贫血的诊断，研究药物致敏的红细胞，输血反应的研究。【试剂和材料】1 .多特异性抗球蛋白试剂、抗IgG、抗C3d。2 . EDTA抗凝的受检者红细胞2ml。【操作程序】1、直接Coombs试验1. 1将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的试管中，用生理盐水洗涤3次（3400rmin,离心Imin）。每次洗涤后，将上清液全部倒出。1.2 加入2滴多特异性（抗IgG,抗C3d）或抗IgG或抗C3d,3400rmin,离心15秒，用肉眼或借助显微镜观察凝集，并记录结果。1.3 判读结果须一定角度轻轻摇动试管直至松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。1.4 如阴性结果，在室温中放置510分钟，再离心一次，重读结果。这样做阴性反映有事会变成阳性。2、阳性对照2.1 每批新的试剂，或在4保存时间过长，需做阳性对照试验，至少每月一次。1滴阳性对照细胞加2滴直接抗人球蛋白试剂，离心判读结果。2.2 在试验中，于判为阴性的试管中加入1滴阳性对照细胞，再离心，然后重悬浮，判定结果。如果最初洗涤能充分除去所未结合的球蛋白，结果为阳性。2.3 阳性对照细胞（IgG抗D致敏细胞）制备：一份市售抗D （IgG）试剂（效价（1： 8） +1份Rh（D）阳性。型红细胞混匀,37水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，配成3%红细胞悬液，当天使用。3、结果解释阳性反应一一出现红细胞凝集。表示红细胞上有相应抗体存在。阴性反应一一红细胞不凝集。表示红细胞上没有相应抗体存在。【注意事项】1、红细胞洗涤不充分，微量残留的未结合的球蛋白将要中和抗人球蛋白试剂。2、直接抗人球蛋白试验的试管在初读结果之后，在放在室温中510分钟。这样孵育之后，若细胞被C3d或IgA所致敏时，重新离心观察结果可使阴性结果转变成阳性。而IgG致敏的红细胞在孵育以后可能反映更弱。3、试剂含有0.1%WV叠氮钠。如果摄入会中毒。4、本试剂仅用于体外诊断。【支持文件】血站技术操作规程【相关记录】Coombs试验登记表；