2024淋球菌感染的实验室诊断方法：分离培养.docx

2024淋球菌感染的实验室诊断方法：分离培养淋球菌感染的实验室诊断方法：标本的采集和运送淋球菌感染的实验室诊断方法：革兰染色镜检1培养基分离淋球菌一般选用营养丰富的选择性培养基。常用的选择性培养基有改 良的Thayer-Martin (T-M)培养基、含抗生素的血液琼脂或巧克力琼脂 培养基。可购买商品化的培养基或实验室自配，培养基应密封在塑料袋 中，于4。C冰箱贮存，贮存时间不应超过3周，时间过久则分离率降低。 分述如下：1.1 Thayer-Martin(T-M)培养基D成分。包括GC基础培养基，血红蛋白粉，VCNT抑菌剂(含万古霉 素、多粘菌素、三甲氧节胺嚓咤和制霉菌素)，ISO-VitaIeX增菌剂。2)配制方法。以配制500 mL培养基为例，步骤如下：称取GC琼脂粉18 g,置一烧瓶中，加235 mL蒸储水，摇匀后置沸水浴15min30 min ,使琼脂完全溶解;称取血红蛋白粉5 g ,加于乳钵内，用250 mL蒸储水分次研磨溶解 后,置沸水浴15 min 30 min ;将上述两种溶液置于121。C高压灭菌15 min ,冷却至50 ,在无菌 条件下将血红蛋白溶液缓慢加入到琼脂液内，弃去可能存在的血红蛋白 沉渣；取1小瓶Iso-Vitalex增菌剂，用所附的一小瓶稀释液溶解后加入到 步骤3所配的混合液中，边加边摇；取一小瓶VCNT抑菌剂，用5 mL无菌蒸储水溶解后加入到步骤4 所配的混合液中，边加边摇；在无菌条件下将配好的培养基分装入无菌平皿中，待凝固后，用塑料 袋封存，置4。C冰箱保存备用。1.2 GC血液琼脂培养基1）成分。包括GC基础培养基和脱纤维羊血。2）配制方法：以配制500 mL培养基为例，步骤如下:取GC琼脂粉18 g,置一烧瓶中，加450 mL蒸储水，摇匀后置沸 水浴15min30 min ,使琼脂完全溶解；将GC琼脂溶液置于121。C高压灭菌15 min ,冷却至50 ;在无菌条件下将50 mL脱纤维羊血(羊血在临用前置37。C水浴预热) 加入到琼脂溶液中，摇匀后分装于无菌平皿中，待凝固后，置塑料袋封 存，置4。C冰箱保存备用。1.3 Amies运送培养基1)成分。活性炭5 g ,氯化钠(NaCI)1.5g ,磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.575 g ,磷酸二氢钾(KH2PO4)0.1 g ,氯化钾(KCl)0.1 g ,硫代乙酸钠0.5 g z 氯化钙(CaCI)0.05 g氯化镁(MgCI)0.05 g琼脂2 g ,蒸储水500 mLo2)配制方法：以配制500 mL培养基为例，步骤如下：将各种成分加到500 mL蒸储水中，充分混合；121。C高压灭菌15 min ,冷却至50 ,然后分装于小管中，每管6 mLo在分装时，不 时摇动混匀琼脂，以使活性炭末处于均匀混悬状态；置2(8。C可储存6个月。2接种标本取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置于室温中预温。将取材的拭 子转动涂布于平皿的上1/4范围，然后用接种环分区划线，以保证获得较 纯的单个菌落。3培养条件接种标本后，立即将平皿置于(36±1)°C ,含5% 10% CO2 ,湿润(70% 湿度)的环境中培养。淋球菌为需氧菌，但初代分离需要CO2 o CO2 环境可由CO2培养箱、CO2产气袋或烛缸提供。使用烛缸时，应使用白 色、无芳香味的无毒蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。4观察结果培养24 h后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至72 h ,仍无 菌生长才可丢弃，做出淋球菌培养阴性的报告。因为某些菌株，如AHU- 营养型菌株生长缓慢，且菌落小。如果培养时间不足72 h ,它们可能会 被忽略。对选择性培养基上分离的可疑菌落应做进一步鉴定。