人Human新喋呤NeopterinELISA检测试剂盒.docx

人（HUlnan）新喋吟（Neopterin） ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理:NeoPterin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELlSA）.已知NeOPterirI浓度的标准品、 未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Neopterin和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后, 加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B,和酶结 合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NeOPterin的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8已保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80nmolL1 瓶（0.6ml）1 瓶（O. 3ml）按说明书进行稀稀空白对照1 瓶（I-Oml）1 瓶（O. 5ml）即用型标准品稀释缓冲液1 瓶（4.0ml）1 瓶（2.0ml）即用型生物素标记的抗般蛇恒羔抗体1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型亲和涯酶素-HRP1 瓶（8.0ml）1 瓶（4. OjilD即用型洗涤缓冲液1 瓶（20ml）1 瓶（IOml）按说明书进行稀释底物A1 瓶（6.0ml）1 瓶（3. OmD即用型底物B1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型终止液1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1 瓶（12ml）1 瓶（6.0ml）即用型自备材料1 .蒸储水。2 .加样器：5uK IOuK 50uK IOOuK 200ul> 500ul IOOOul03 .振荡器及磁力搅拌器等。安全性1 .避免直接接触终止液和底物A、Bo 一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2 .实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3 .不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1 .试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2 .实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3 .不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4 .使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5 .使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6 .洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7 .底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触, 有毒。实验完成后应立即读取OD值。8 .加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9 .按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，100OXg 离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。IOoOXg离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液一-IOoOXg离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。IoooXg离心10分钟，取上清液5、保存如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70。C保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37C或更高的温度加 热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1 .标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按 下表中进行：80 nmol/L（6号标准品）原信浓度不用稀释直接加入50ulo40 nmol/L（5号标准品）IOOul的原倍标准品加入IOOul的标准品稀释液20 nmol/LWWA<（4号标准品）IOOul的5号标准品加入IOOul的标准品稀释液10 nmol/L（3号标准品）IOOul的4号标准品加入IOOul的标准品稀释液5. 0 nmol/L aaaaa<（2号标准品）IOOul的3号标准品加入IOOul的标准品稀释液2. 5 nmol/L-.-.-.（1号标准品）IOOul的2号标准品加入IOOul的标准品稀释液0 nmol/L（空白对照）原始浓度不用样释直接加入50ul°2.洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸储水50倍稀释。操作步骤2 .使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生 加样上的误差。3 .根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个 样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液L 1稀释后加入50UI 于反应孔内。4 .加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物 素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37温育1小时。5 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。 如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。6 .每孔加入60UI的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀，37温育30分钟。7 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。 如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。8 .每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀，37温育10分钟。避免光照。9 .取出酶标板，迅速加入50Ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。10 在45Onm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度 (nmol/L)AAAAAA/A8080样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能1 .灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0. 990o2 .特异性：不与其它细胞因子反应。3 .重复性：板内、板间变异系数均小于10九结果判断与分析1、仪器值：于波长45OnnI的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的NeOPterin标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线，样 品的Neopterin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-8OnmOl/L 4、敏感度：0. 1 nmol/L