羟自由基清除能力测定试剂盒说明书.docx

羟自由基清除能力测定试剂盒说明书微量法IOOT由6S注意；正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。渊定意义：羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。渊定原理：H2OFe2+通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲-Fe?+水溶液中Fe?啜化为Fe3*,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度卜.降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。自备实验用品：恒温水浴锅、函标仪、96孔板和蒸福水。试剂组成和配制：提取液：液体Ioom1X1瓶，4保存。试剂一：液体12m1X1瓶，4避光保存。试剂二：液体6m11瓶，4C避光保存。试剂三：液体12m11瓶，4C保存。试剂四：液体6m11瓶，4C保存。样品的制备：1 .组织：按照组织质量(g)：提取液体枳(m1)为1：510的比例(建议称取约0.1g组织，加入Im1提取液)进行冰浴匀浆,然后IOoOog,4离心IOmin,取上清,置冰上待测。2 .血清、果汁等液体样品可直接测定。3 .提取物(或者药物)可配制成一定浓度，如5mgm1°操作步I1h1、醉标仪预热30min,调节波长至536nm02、工作液配制：使用之前按照每管试剂一：试剂二：试剂三=IOo:50:100(1)的比例配制，用多少配多少，混匀。3、在EP管中加入如下试剂空白管对照管测定管工作液(1)250250250混匀，防止局部颜色过浓样品(1)50试剂四(1)5050H2O(1)10050混匀,37C保温60min,8000g25°C离心5min,吸取2001于96孔板中测定536nm处吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。注意：空白管和对照管只需测定一次。计算公式：羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%A空、A对、A测：空白管、对照管和测定管的吸光值。注意事项：为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。