如何精准选择色谱柱？.docx
如何精准选择色谱柱?现在市场上色谱柱种类繁多，不同类型的色谱柱分离对象不同，因此，必须学会精准选择液相色谱柱，在选择色谱柱之前一定的认识和了解色谱柱的一些基本知识。今天，小析姐就从分离模式选择、样品信息、色谱柱参数等方面与大家聊一聊如何精准选择液相色谱柱。液相色谱柱种类繁多，在精准选择液相色谱柱之前，首先必须选择HP1C的分离模式，根据使用的固定相和流动相的组合不同，可以得到下列各种各样的分离模式。分惠模式特征反相法(RPC)根势在S3定相M科)和流式相(»>!>中分配系数不同分离固定相嫌性比洸期8低采用甲丽.乙JrTHF等有矶而相a水或If冷溶液的混合溶液作流动相没履力越堤亲水性相互作用法(HIuC) 楸据奈米怪相互作用透行分X 使用校在R的IE定用 采用乙用等有机溶利和水或0冷溶液的叁合溶液作流动相 流功帼的极性越昌法要力越登 运用于分析性育的物.嗜正相法(NPC) 杵品在S1定相和工坊相中分配系11不同减行分鼻 90定格援性比潍西用握采用己馁、建再算有委的有色需列的混台需赛作流动相 46博榻愎虺鹿筏92力0翟配位体交换法(1EX)根络台罩号分S1Mij48K2*M7Kf1CCM组合侵网尺寸施能法耶索余件1支作用法帆川离子将IH法(IEX)京卡子支H体4C千寿康的电帼五作用(毋乐)送行分寓子化校单次B1子化夏收段出主3M于有机第分3离子色博法(IC)偿*平文IMt和*王唐韵的电相互作即(tt)分因R使用低柔度的很功融.碑汇使网电4检WB主要U用于无子的分析尺寸I阻法(SEC)刑期分子,“修网状第*或nn徵分子算作用未分“千尺寸川IB色E9温*分必霸在ItN与棒品分子偈无桁反作用力的鲁件下韧道律丛中的厩分发分子尺寸从大旧小的!?;»»7M于a分子仪自的分子胃定、分子分布洌定及弱事物的tfi咸分柝算IK子交快法(IEC) IS子女体和舄子海Jt的11电相互作用(tt)送行分离 柔用在分析试林电看差总大的PH下具*充分馒冲就力的0；申波作澧动相 可通过流动箱的pH、总采度直子将覆亲词节律用的洗版位IiIR水性相互作用法(HIC)审身at本性相互作用进行分固定相台或水性今CE通常脩况下高Jt本度下费用.B簿JB降低后法股主要适用于缮台虐的分析亲和色调法(AFC) 根生物的分子识制族力未分离 有很离妁送搔性 采用相互作用及M位体拜矣.pH.青子强度正合分析祥fi的JJ冷液 主要适用于生U活性镭质的净"和浓绿手性分离法(CS)根据手性分子识别提力的不同未分H有很高的送择性复合模式支持包含分JW式分了解样品了解待检样品的结构、分子量、溶解性、离子化、极性、PH值等物理化学性质，再参照下图选择适合的分离模式和精准的液相色谱柱固定相：auracceck*CM.a0.60eZ,MBd0X4色谱柱参数色谱柱性能影响因素有很多，例如，硅胶纯度、色谱柱尺寸、颗粒形状、粒径、表面积、孔径，化学性质包括键合类型、碳覆盖率、封端，下面依次介绍各参数对色谱柱性能的影响，并根据以上参数精准地选择液相色谱柱。1、硅胶纯度硅胶纯度对强极性化合物的分离最为重要，残留金属离子浓度、硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。2、色谱柱尺寸增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；含量测定、溶出检测等对于分离的要求较低，可选用较短的色谱柱，减少运行时间。内径大，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。内径小的色谱柱灵敏度较高，峰型更窄，但是载样量较小。如果载样量满足要求,需要更高更尖锐的峰提高灵敏度,可以选择更小内径，但压力较大，对系统要求较高。短柱（15100mm）运行时间短、柱压低；长柱（150-250mm）分辨率高、运行时间长；小内径（2.1mm）检测器灵敏度高；大内径（3-21.2mm）载样量高、耐污染、寿命长。3、颗粒形状粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；当使用粘度较大流动相时，球形颗粒可降低柱压，延长色谱柱寿命。常见的两种填料颗粒类型：全多孔硅胶型表面多孔/核壳型相同键合基团键合技术选择性相同；全多孔填料更为常见，键合相种类更多；核壳型填料可以在较大的粒径下得到更高柱效，从而降低使用压力。4、粒径粒径指柱填料颗粒直径的大小,实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值,通常1.5-10mo粒径小的色谱柱分离度较好，但色谱柱压力更大，如果5m粒径的色谱柱分离度稍有不足,则同型号3m色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。粒径/类型压力柱效3.5m全多孔123bar7,8002,7m核壳180bar12,0001.8m全多孔285bar12,5005、表面积表面积是指颗粒外表面与内部孔面积的总和，以m2g表示，高表面积对于多组分样品的分离具有较强的保留能力、柱容量和分离度；表面积低的柱填料能迅速达到平衡状态，对于梯度洗脱尤为重要。6、孔径孔径是指填料颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是120300A,多孔色谱填料与目标物的作用绝大部分(>95%)是发生在填料颗粒的内部，即孔内的，所以孔对于色谱填料也是最重要的参数之一，一款填料孔径大小(POreSiZe)和孔径分布(PoreSiZeDistribution),在绝大多数的色谱分离纯化中，起到关键性作用。大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，达到充分分离，改善峰形,所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子;较小孔径提供较高的表面积,可用于较大的载荷量,并保留小的有机化合物,可用于小分子有机物到聚合物的分离。孔径和粒径的关系:粒径(m)孔径(A)IOO1X)00IOOOO10QOOO1.000.000IaooO(OOOIOO(XXMX)O样品分子直径小于平均孔径才能进入微粒内部，所选色谱柱孔径至少是样品流体学直径的4倍，一般根据样品的分子量选择适合的孔径。分子量V2000,选择孔径80180A分子量>2000,选择孔径300A,30OA全多孔色谱柱可用于分离蛋白质和多肽。7、不同的载碳量载碳量越高，固定相传质效应增加，高载碳量，有利于不易保留化合物的分离，水解稳定性好，重现性好；低载碳量，有利于分析有一定保留的化合物，降低溶剂损耗、减少运行时间。8、封端硅胶键合相填料中有部分未封端的残留硅羟基,封端可以减轻待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善保留和峰形，这对于碱性化合物尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。
