2023三级淋巴结构在肿瘤免疫治疗中的研究进展.docx

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1、2023三级淋巴结构在肿瘤免疫治疗中的研究进展摘要三级淋巴结构(tertiaryIymphoidstructures,T1S)是指在病理生理环境下，淋巴细胞在非淋巴器官内聚集形成的有组织的异位淋巴结构。成熟的T1S包括被T细胞包围的B细胞区域和生发中心，普遍存在于多个瘤种中，是肿瘤细胞与免疫细胞相互作用的重要场所，与患者预后密切相关。因此,诱导形成T1S,使T细胞和B细胞发育分化为能够识别杀伤肿瘤细胞的效应细胞和记忆细胞，可以介导抗肿瘤免疫反应。本综述主要介绍了T1S的组成成分和形成过程，总结归纳现有的检测手段，强调了T1S不同成熟度、位置和内部组成等特征对肿瘤免疫疗效的影响和预测价值，并探讨

2、诱导T1S作为肿瘤治疗手段的应用潜能。一一刖百肿瘤微环境(tumormicroenvironment，TME)是肿瘤发生、发展和转移的土壤，除肿瘤细胞外，还包含免疫细胞、成纤维细胞及肿瘤血管系统等，其中三级淋巴结构(tertiaryIymphoidstructures,T1S展反映TME状态的重要标志物1-2。T1S是在自身免疫性疾病、慢性感染及肿瘤等慢性炎症刺激下，在非淋巴器官内形成的异位淋巴样结构，反映了外周组织在长期暴露于由趋化因子和细胞因子介导的炎症信号时出现的淋巴新生2。多项研究表明，B细胞和T1S与不同肿瘤患者更好的预后相关3-5,但是T1S塑造肿瘤微环境,发挥抗肿瘤效应的具体机制

3、仍不清楚，因此深入解析T1S有助于充分挖掘其在抗肿瘤免疫反应中的潜在应用价值，指导肿瘤精准免疫治疗。本文重点介绍T1S的组成及其形成过程，检测方法，同时强调了T1S对肿瘤免疫反应的影响并讨论通过诱导T1S形成增强抗肿瘤免疫疗效的可能性。01.T1S的形成和细胞组成在肿瘤微环境中，T1S的形成过程极为复杂，涉及多个细胞及细胞/趋化因子的调控作用。目前普遍认为T1S的发育与形成过程类似于次级淋巴结构(secondaryIymphoidorganzS1O),由淋巴组织诱导细胞(1ymphoid-tissueinducer,1Ti)和淋巴组织形成细胞(Iymphoidtissueorganizer,1

4、To)通过相互作用在特定部位形成。在小鼠肿瘤中，1Ti可以是T细胞和B细胞6,在人类肿瘤中，1Ti可以是固有淋巴样细胞(innateIymphoidce11J1C)NKp44+I1C3细胞等7。1To则主要是基质细胞，如肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associatedfibrob1ast,CAF)等6。在T1S形成过程中,一方面1Ti通过表达淋巴毒素。邛2(Iymphotoxin12,1Ta12府1To上的淋巴毒素B受体(1ymphotoxin-receptor,1TR造合促进1To分泌血管内皮生长因子qvascu1arendothe1ia1growthfactorC,VEGFC),介导

5、HEV的形成，同时HEV也可以分泌多种黏附分子(ICAM1xVCAMkMADCAM1),进而促进B细胞和T细胞的发育2。另一方面，1Ti通过分泌I1-17,与1To上的I1-17R结合，促进1To分;必CXC112xCXC113xCC119和CC121等趋化因子这些趋化因子可以从附近的HEV中募集CXCR5(CXC113受体)和CCR7(CC119/CC121受体)阳性的淋巴细胞8,组织形成T细胞和B细胞区(图1)。FDC趋化因子图1T1S的形成过程成熟T1S的结构是T细胞区包围着含有生发中心的B细胞区，由免疫细胞和基质细胞组成的有组织的聚集体。基质细胞除了作为1To分泌趋化因子招募免疫细胞外

6、，还能进一步转分化为滤泡树突状细胞(fo11icu1ardendriticce11s,FDC)和成纤维网状细胞(fibrob1asticreticu1arce11s,FRC),分别支持B细胞区和T细胞区。免疫细胞主要包含树突状细胞(dendriticce11szDC),FDC,CD20+B细胞，CD3+T细胞，CD4+滤泡辅助T细胞(fo11icu1arhe1perT,Tfh),CD4+辅助T1细胞(he1perT1,Th1),CD8+细胞毒性T细胞(cytotoxicT1ymphocyte,CT1,口调节性T细胞regu1atoryTce11s,Tregs)等，DC和B细胞可将局部抗原呈递给

7、T细胞，从而导致T细胞活化和增殖。Tfh和Th1则可以通过共刺激分子或受体配体相互作用促进B细胞转化为增殖的B细胞簇,即生发中Xgermina1centre,GC)在这个过程中，B细胞经历了亲和力成熟，类别转换和体细胞超突变的过程，成为具有成熟免疫功能的B细胞2。总体而言，T1S的形成与发展是一个多步骤、动态变化过程，免疫细胞衍生的促炎信号作为诱导剂，活化的成纤维细胞通过建立并维持淋巴细胞结构或产生关键的趋化因子来充当组织者，将多种细胞招募到相应位置，这些细胞通过广泛的细胞间相互作用，最终分化成熟，并发挥免疫效应。02、T1S的标记与检测方法目前，T1S已在肺癌、胰腺癌、结直肠癌和黑色素瘤3-

8、5,9等多个瘤种中被检测，然而不同瘤种对T1S的标记策略存在较大差异，这也导致不同癌症类型的数据无法直接进行比较。常用的方式主要有苏木精-伊红染色(hematoxy1in-eosinstaining,H&E)、免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)、多重免疫组织化学(mu1tip1eximmunohistochemistry,mIHC)/多重免疫荧光(mu1tip1eximmunof1uorescencefmIF)染色以及测序检测(趋化因子-SCOre等)，见表1。寰1T1S相关分子标记物、检费方法及与陵后的关系肿相类型样本数治疗方式T1S成分检涌标记物检测方法预

9、测颈后BM,0168NAT细胞；B1ff1胞；成熟CD3+；CD20+；DC-1amp+;H&E有利DC；HEVPNAd+;肺癌196新辅助化疗T细胞；成熟DC；巨噬班CD3+；DC-1amp+;CD68+；IHC有利胞；CD2Q;CD138;B班胞；浆细胞；生发中心CD23+1gD-A1D+Bc16;MraI9)140新辅助放化疗T细胞；Btff1胞；巨睢如CD4+tCD8;CD20;IHC有利胞；HEV；CD80;CD163*；Foxp3iPNAd+；结直肠癌四351新辅助放疗Tffi1K；Bffifi；FDC;CD3;CD20+；CD21;IHC有利HEV；PNAd+；1yve-I+；C

10、C12I,淋巴管；趋化因子CXC113；黑色素相86新辅助ICIS和T细胞；B如胞；FDC；CD4+tCD8;CD20;mIF有利能向治疗Treg；CD21+；FoXP3+；尿路上皮癌I24ICIsT细胞；B细胞CW+；CD23+；IF有利肾透明细胞232VEGFie向趋化因子CC12、CC13、CCUxCC15、12-Chemokines-有利癌四治疗CC18、CC118、CC119、CC12kCXC19、CXC11O.CXC1I1WCXC113；signature结直肠癌975NA趋化因子CC12、CC13、CCUxCC15、12-Chcmokincs有利CC18、CC118、Ce119、

11、CC12kCXC19、CXC110、CXC1I1ff1CXC1I3;signatureH&E：苏木精-伊红染色；IF：免疫荧光；m!F：多免疫荧光；IHC:免疫组化；NA:未知H&E染色是表征T1S最简单的技术,在形态学上，T1S被识别为明显的淋巴滤泡样结构和致密的细胞聚集物，但是H&E染色无法精准评估T1S种类且受观察者影响较大，评估结果有一定的局限性。IHC和mIHCmIF是对T1S的检测较为准确和特异性较高的检测手段，主要应用多种细胞的标志分子对连续的肿瘤切片进行双重或多重标记，然后利用定量数字病理学软件来评估T1S的位置、数量、大小及成熟度等,实现定性及定量分析。一般情况下，由T细胞（

12、CD3+细胞）包围着致密B细胞（CD20+细胞），并存在HEVxFDC等细胞的区域可定义为T1S（图2）。S2食管癌中T1S的表达A、D：食詈*癌组织中的T1S（HE40）；B、E：T1S中的CDBK细胞区（IHCX40）；C,F：T1S中的CD2（Biff1舱区（IHCX40）现有的研究使用不同的标记分子组合来识别这些结构。mIHCmIF检测相比于传统的IHC检测，可同时标记更多分子且不受抗体类型的限制，节约了时间成本，但受染色过程复杂、成本较高等因素限制，此方法暂时无法在临床上进一步推广应用。此外，考虑到基于活检或手术等取样方式检测T1S存在异质性,更多研究尝试利用与T1S相关的细胞/趋化

13、因子等分泌蛋白表征T1S,解决了对T1S的研究完全依赖于石蜡切片的局限性。如有研究利用经典的12-趋化因子（CC12、CC13、CC14、CC15、CC18、CC118xCC119、CC121xCXC19、CXC1IOxCXC111、CXC113）,根据特定趋化因子的基因表达特征来定义T1S,如CXC113xCC1I9和CC121的高表达预示着淋巴细胞的募集和淋巴新生10-11,但是这种方法由于组织测序成本较高，又不能完整表示T1S的成熟度及空间表达和定位，临床应用价值有限。由此可见，目前T1S的检测方法各有利弊，未来有待开发既可全面表征T1S信息，又具备成本低、操作简单且便于临床推广应用等优

14、点的新方法。03、T1S对免疫反应的影响及预测价值B细胞和T1S是免疫微环境的重要组成部分，与免疫治疗的疗效和患者预后密切相关。越来越多的研究发现在接受免疫检查点抑制剂(immunecheckpointinhibitors,ICIs)治疗的过程中,应答者和非应答者之间T1S的成分有明显的差异，提示T1S对ICIs反应可能具有较高的预测价值。如位于T1S内的PD-1+CD8T细胞的浸润情况可预测晚期非小细胞肺癌患者对PD-1的阻断反应14。既往研究表明，T1S对PD-(1)I或PD-(1)I联合细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CT1A-4)阻断等免疫治疗的影响大多是积极的，这在黑色素瘤5、膀胱癌1

15、3、肺鳞癌15等多个免疫治疗队列中均已被证实。然而，也有一些研究并未发现T1S对患者预后的积极影响，提示不同肿瘤组织中T1S的作用存在差异，除受肿瘤类型、分期的影响外，这种差异可能来源于T1S的大小、形态、成熟度、空间位置和内部组成多样性等。3.1 不同成熟度的T1S对免疫反应的预测作用T1S在肿瘤微环境中存在不同的分化阶段，分别为早期T1S.初级滤泡样T1S及次级滤泡样T1S16o早期T1S(CD21-CD23-)是密集的淋巴细胞簇含有HEV不含FDC。初级滤泡样T1S(CD21+CD23-)含有HEV及FDC,但不含GCo次级滤泡样T1S(CD21CD23+)更为成熟，含有HEV.FDC及GCo不同成熟状态的T1S发挥作用不同。如在肺鳞癌中，只有含有GC的次级滤泡样T1S高表达免疫反应相关基因，若GC形成受损，T1S将不再有预后价值15。Posch等16评估