仪器分析报告.docx

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1、目录前言3实验一、如何在细胞培养室中规范操作、细胞培养的基本操作方法4一、实验目的4二、实验原理4三、实验方法41、贴壁细胞培养方法42、悬浮细胞培养方法5四、注意事项5实验二、显微镜、多功能酶标仪、紫外可见酶标仪的操作6一、实验目的6二、实验原理61、正、倒置荧光显微镜62、多功能酶标仪61、正置显微镜操作62、倒置荧光显微镜操作73、多功能酶标仪8四、实验结果8五、注意事项81、正、倒置荧光显微镜82、多功能酶标仪9实验三、各种类型高速离心机的使用及动物饲养室的操作10一、实验目的10二、实验原理10三、实验内容10四、注意事项11离心机注意事项11动物房注意事项11实验四、接触角测试仪、

2、动态光散射激光粒度与电位分析仪的使用及常用光谱分析技术与仪器操作13一、实验目的13二、实验原理131 .接触角测试仪原理132 .动态光散射的基本原理143 .光谱分析原理15三、实验内容181 .接触角测试仪操作方法182 .激光粒度仪的操作方法183 .光谱分析各仪器操作方法19四、注意事项221 .接触角测试仪注意事项222 .动态光散射的注意事项223 .光谱分析各仪器注意事项23实验五、二维电泳系统、快速高效蛋白纯化工作站及实时荧光定量PCR仪的使用25一、实验目的25二、实验原理251 .二维电泳系统工作原理252 .快速高效蛋白纯化工作站工作原理253 .实时荧光定量PCR工作

3、原理26三、实验内容271 .二维电泳系统操作方法272 .快速高效蛋白纯化工作站操作方法283 .实时荧光定量PCR操作方法29四、注意事项311 .二维电泳系统注意事项312 .快速高效蛋白纯化工作站注意事项313 .实时荧光定量PCR注意事项31实验总结32前言本次生物医学仪器分析与应用I课程实验共五个，包括：如何规范在细胞培养室中操作、荧光显微镜的操作及酶标仪的使用、高速离心机的使用及如何动物房中规范操作、接触角测试仪、动态光散射激光粒度与电位分析仪的使用及常用光谱分析技术与仪器操作、二维电泳系统和快速高效蛋白纯化工作站及实时荧光定量PCR仪的使用。本门课程实验是在哈工大科学院2E栋完

4、成的，指导老师分别为韩凤桐、岳磊、张建、张楠曦、曲有鹏。非常感谢五位老师在本学期给予我们的细致生动的教学，经过这次的生物医学仪器分析与应用I课程实验,我个人得到了不少的收获,一方面加深了我对仪器使用理论知识的认识,另一方面也提高了实验操作能力。实验一、如何在细胞培养室中规范操作、细胞培养的基本操作方法实验时间：2014年11月26日实验地点：科学园2E栋I11室指导老师：韩凤桐一、实验目的了解细胞培养室的使用规则，掌握细胞传代和细胞培养的基本知识。二、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再

5、培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、PH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。三、实验方法1、贴壁细胞培养方法1）37水浴锅内预热培养液、PBS,室温下预热胰酶（胰蛋白酶液）。2）实验前，无菌操作台需用紫外灯照射15-30分钟灭菌。3）用75%酒精擦拭双手，点燃酒精灯，取出细胞。4）小心吸（倒）出旧培养液，再加入PBS洗掉残留的培养液。5）加入适量胰蛋白酶液消

6、化细胞（细胞变圆，可以吹打下来即可终止消化,以免消化过度，影响细胞生长），用培养液终止消化反应。6）吹打制成细胞悬液，吸入离心管中,800转/分钟离心5min。7）弃上清液，加入PBS,吹打清洗细胞，800转/分钟离心5min。8）弃上清液，加入新培养液，吹打制成细胞悬液。9）将细胞悬液吸出分装至新培养瓶中，加入适量培养基并适当旋松瓶盖，放入CO?培养箱中培养。10）实验后清理实验垃圾，并用1%。新洁尔灭水擦拭超净台。2、悬浮细胞培养方法1）37水浴锅内预热培养液、PBSo2）实验前，无菌操作台需用紫外灯照射15-30分钟灭菌。3）用75%酒精擦拭双手，点燃酒精灯，取出细胞。4）将细胞悬浮液摇

7、匀，吸出一定量分装至新培养瓶中，再分别补充适量培养液，旋松瓶盖，放入CO?培养箱中培养。5）实验后清理实验垃圾，并用1%。新洁尔灭水擦拭超净台。四、注意事项D本实验室为特殊洁净室，未登记使用者或与未经实验中心管理人员许可者请勿入内。2）进入细胞室工作人员必须登记，将姓名、联系方式等信息填写在培养室门上表格内，必要时便于联系。3）细胞培养工作人员固定在各自培养室内工作，禁止随意更换培养室。4）进入细胞培养室工作，必须更换细胞室内的白服和拖鞋，必须经过风淋消除衣服和皮肤表面灰尘和微生物，进出细胞培养室关好风淋室门，长发的同学请束发。5）禁止将离心配平的液体倒入水浴锅，避免水浴锅水污染。6）做完实验

8、必须及时清理超净台和实验室边台，保持超净台和培养室的整洁。7）及时清理实验过程中的垃圾，按要求分类处理回收的培养瓶，不能把垃圾留给洗刷老师，不清理垃圾者罚每天早上清理细胞室垃圾1个月。8）离开培养室必须将白服挂好，将拖鞋摆放整齐。9）夜晚，最后离开细胞培养室的人员，关闭细胞室内的照明和灭菌灯，夏季，最后离开者关闭培养室内的空调。10）必须按时参加细胞室卫生打扫工作，多次逃避劳动者禁止进入细胞室工作。实验二、显微镜、多功能酶标仪、紫外可见酶标仪的操作实验时间：2014年12月3日实验地点：科学园2E栋117室指导老师：岳磊一、实验目的1、了解倒置荧光显微镜及酶标仪的工作原理；2、掌握仪器的使用方

9、法；3、了解操作中的注意事项；二、实验原理1、正、倒置荧光显微镜荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，荧光光源一一般采用超高压汞灯（50-200W）,它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长，所以需家用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。没种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。2、多功能酶标仪

10、光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号。电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器经行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果。三、实验方法1、正置显微镜操作1）移去显微镜防护罩，检查显微镜镜头和滤光片，打开光源；2）如需使用荧光，打开汞灯电源开关，稍后片刻，观察“BURNERON”指示灯亮并伴随“啪嗒”一声则显示汞灯开启正常；实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA（CDNA）拷贝数最敏感、最准确的方法。

11、如果用于RNA检测，被称为逆转录实时PCR即（Rea1-timeRT-PCR）是实时PCR法，它是指对DNA或经过反转入（RT-PCR）的RNA通过聚合酶链式反应并实时监测DNA的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。Rea1TimePCR的基本目标是精确测量和鉴别非常微量的特异性核酸，从而可通过监测CT值而实现对原始目标基因的含量定量。实时荧光定量PCR法最大的优点是克服了终点PCR法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差，实现DNA/RNA的精确定量。该技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量，而且具有灵

12、敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点，该技术在医学临床检验及临床医学研究方面有着重要的意义。三、实验内容1 .二维电泳系统操作方法1）吸取适量含有样品的水化液放入标准型胶条槽中，不要加入过量的水化液。2）从酸性端（尖端）一侧剥去IPG胶条的保护膜，胶面朝下，先将IPG胶条尖端（阳性端）朝标准型胶条槽的尖端方向放入胶条槽中，最后放下IPG胶条平端（阴极），使水化液浸湿整个胶条，并确保胶条的两端与槽的两端的电极接触。3）IPG胶条上覆盖适量Immobi1ineDryStriP覆盖油，盖上盖子4）将标准型胶条槽的尖端背面电极与IPGPhOr仪器的阳极平台接触,胶条槽

13、的平端背面电极与IPGPhOr仪器的阴极平台接触。5）设置IPGPhOr仪器运行参数：IPG胶条水化的电压，温度和时间；等电聚焦电泳时的梯度电压和温度6） IPG胶条水化后可自动进行等电聚焦电泳。7） IPG胶条平衡两次，每次15分钟,有利于蛋白从第一向到第二向的转移。第一步平衡在平衡液中加入DTT,使变性的非烷基化的蛋白处于还原状态；第二步平衡步骤中加入碘乙酰胺，使蛋白质疏烷基化.8）将IPG胶条轻轻润洗，并去除多余的平衡缓冲液，然后放入第二向SDS胶中。9）垂直SDS-PAGE,电泳槽中装满电泳缓冲液，并打开温控系统，调节温度为15o10）将平衡好的IPG胶条浸入电极缓冲液中几秒钟。11）

14、将IPG胶条小心的放置于SDS胶面上，并轻压使IPG胶条与SDS胶面充分结合，上面覆盖2m1热的琼脂糖溶液（75t3C）,使琼脂糖在5分钟内凝固。其余的IPG胶条重复上述操作。12）将胶盒插入电泳槽中，开始电泳。采用垂直的SDS胶电泳，不必象水平电泳一样，电泳过程中去除IPG胶条。13）当澳酚蓝染料迁移到胶的底部边缘即可结束电泳。14）跑好的胶转移到染色盒里固定，准备染色。2 .快速高效蛋白纯化工作站操作方法打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕，双击桌面上UNICoRN图标，进入操作界面。准备流动相和样品清洗管道及装柱首先将A1管道放入平衡液或bandingbuffering中，将B1管道放入高

15、盐溶液中或e1utionbuffering中，在systemcontro1窗口点击manua1pumppumpwashbasic,选中A1,B1管道为ON,executeo泵清洗程序会自动运行结束。选择manua1pumpf1owrate,输入流速Im1min,insert；选择manua1A1armfemona1armpressure,设置higha1a*m,insert,executeo将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道。手动运行1）平衡：柱子平衡好了。此时将紫外调零，选择manua1A1arm&mon-autozero,exectue,就准备上样了。2）上样：用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入,不要取下注射器。选择manua1f1owpath-injectionVa1veinject,execute02.1） 用样品泵上样，将样品置于Samp1eVa1ve1号位，点击manua1pum