24、蜂蜜菌落总数检验标准.docx

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1、山西恒达蕾傲生物科技有限公司技术标准页码：1/3文件编码:SXHD/JS-O12版本号：O1题目：蜂蜜菌落总数检验标准制定人：樊朝阳审核人：郭联合批准人：王惠颁发部门：生产部制定日期:2011.02.26审核日期:2011.02.27批准日期：2011.02.28生效日期：2011.03.01分发部门：办公室、质量部、生产部、供销部、财务部文件编写/修订历史：本文件为首次制定1 .目的检验蜂蜜中的菌落总数。2 .适用范围本标准适用于对蜂蜜中菌落总数的检验。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：36Crc,30Ci1C.1.2 冰箱：25。1.3

2、 恒温水浴箱：46oCCo1.4 天平：感量为O1g。1.5 均质器。1.6 振荡器。1.7 无菌吸管：Im1GftO.O1m1刻度）、Iom1（具0.Im1刻度）或微量移液器及吸头。3. 8无菌锥形瓶:容量250m1、500m1o3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密PH试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4. 1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。4. 2磷酸盐缓冲液：见附录A中A-2。4. 3无菌生理盐水：见附录A中A3。5操作步骤5. 1样品的稀释5.1.1 蜂蜜样品：以无菌吸管吸取25m1样品置盛有225m1磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形

3、瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。5.1.2 用1m1无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1m1,沿管壁缓慢注于盛有9m1稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）,振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。5.1.3 按5.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次Im1无菌吸管或吸头。山西恒达蕾傲生物科技有限公司技术标准页码：2/3文件编码：SXHD/JS-002版本号：O1题目：蜂蜜菌落总数检验标准5.1.4 .根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体

4、样品可包括原液），在进行IO倍递增稀释时，吸取Im1样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1m1空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。5.1.5 及时将15m120m1冷却至46C的平板计数琼脂培养基（可放置于46C士恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。5.2培养5. 2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36Ci1C培养48hi2h0水产品30C1培养72h土3h。6. 2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4m1）,凝固后翻转平板，按6.2.I条件进行培养。7. 3菌落计数可用肉眼观察，必要时用

5、放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（COkmy-foningunits,CFU）表示。8. 3.1选取菌落数在30CFU300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的均数。9. 3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。10. 3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为

6、一个菌落计数。6结果与报告11. 1菌落总数的计算方法6.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（m1）样品中菌落总数结果。6.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；;71第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；/72一一第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d一稀释因子（第一稀释度）。山西恒达蕾傲生物科技有限公司技术标准页码：3/3文件编码：SXHD/JS-002版本号：O1题目：蜂蜜菌落总数检验标准6.1.3若所有稀释度

7、的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算：6.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一-部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.2菌落总数的报告6.2.1菌落数小于IOoCFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。6.2.2菌落数大于或等于IoOCFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字,后面用0代替位数；也可用K）的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。6.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/m1为单位报告。