保健食品功能检验与评价方法(2023年版)缓解体力疲劳.docx
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1、保健食品功能检验与评价方法(2023年版)缓解体力疲劳I .1实验项目II .1动物体重1.1.2 负重游泳实验1.1.3 血乳酸1.1.4 血清尿素1.1.5 肝糖原或肌糖原1.2 试验原则1.2.1 动物实验所列指标均为必做项目。1.2.2 实验前必须对同批受试样品进行违禁成分的检测。1.2.3 运动实验与生化指标检测相结合。1.3 结果判定负重游泳实验结果阳性,血乳酸、血清尿素、肝糖原/肌糖原三项生化指标中任二项指标阳性,可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的作用。缓解体力疲劳检验方法动物实验1负重游泳实验1.4 检验原理运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最直接的表现,游泳时间的长短可以反应动物
2、运动疲劳的程度。1.5 仪器与器材游泳箱(大小约50cm50cm40cm)电子天平、铅皮。1.6 实验方法1.1.1 验动物推荐使用纯系小鼠,成年小鼠,体重18-22g01.1.2 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组,以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组,另设二个剂量组,必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。1.1.3 实验步骤末次给予受试样品30min后(酒类样品测试当天可以不灌胃)将尾根部负荷5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm,水温25C1.0C,记录小鼠自游泳开始至死亡的时间,即小鼠负重游泳时间。1.4 数据处理及
3、结果判定游泳时间为计量资料,采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算尸值,F值Foos,结论:各组均数间差异无显著性;尸值、凡a,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。若受试样品组负重游泳时间明显长于对照组,且差异有显著性,可判定该实验结果阳性。1.5 注意事项1.5.1 每一游泳箱一次放入的小鼠不宜太多,否则互相挤靠,影响实验结果。1.5.2 水温对小鼠的游泳时间有明显的影响,因此要求
4、各组水温控制一致,每一批小鼠下水之前都应测量水温,水温以25C为宜,如果过低可能引起小鼠痉挛,影响实验结果,过高(30)则游泳时间太长不便于操作。1.5.3 铅皮缠绕松紧应适宜。1.5.4 观察者应在整个实验过程中使每只小鼠四肢保持运动。如果小鼠漂浮在水面四肢不动,可用木棒在其附近搅动。1.5.5 不同批的小鼠因饲养环境、季节等原因的变化体质上会出现差异。因此受试样品组和对照组应采用同一批动物同时进行实验。2血清尿素测定全自动生化仪测定和二乙酰一后法任选一种。2.1 全自动生化仪测定:按有关仪器说明书和试剂盒操作。2.2 二乙酰一的法2.2.1 原理样品中尿素在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一后
5、和硫氨服共煮,形成一种红色的化合物DiaZine,其颜色的深浅与尿素含量成正比。与同样处理的尿素标准管比较,可求出尿素的含量。2.2.2 仪器和试剂2.2.2.1 721分光光度计,IOm1带塞试管,Im1(或1.5m1)塑料离心管,电炉,锅,灌胃针头。2.2.2.2 尿素试剂盒(二乙酰一后法二乙酰一后应用液、氯化铁一磷酸应用液、尿素标准液(200mg1)2.2.23若无试剂盒,可自行配制试剂。试剂配制方法如下:1g1二乙酰一后溶液:取二乙酰一后1Og,氨基硫腺(thiosemicarbazide)0.2g,氯化钠4.5g,溶于蒸储水并加至IOOOm1o33g1三氯化铁溶液:取三氯化铁1Og溶
6、于浓磷酸20m1中,加蒸储水IOm1,摇匀。酸溶液:取蒸储水800m1,慢慢加入浓硫酸50m1,边加边摇;再加入85%璘酸50m1,摇匀。加入33g1三氯化铁溶液1.5m1,加水至I101 Ommo1Z1尿素标准液(尿素28.01mg/d1精确称取尿素(AR)15O.3mg溶于16mmo11苯甲酸溶液并加至250m1O16mmo11苯甲酸液:取苯甲酸2.0g溶于蒸储水IooOm1中,加浓硫酸0.8m1。2.2.3实验方法2.23.1 实验动物成年小鼠或大鼠,小鼠体重18-22g,Wistar或SD大鼠体重160-200go推荐使用雄性小鼠。2.23.2 剂量设计和分组大鼠以人体推荐量的5倍为基
7、本剂量。其余同1.3.2。2.23.3 实验步骤223.3.1高尿素模型的建立及标本制备:末次给受试样品30min后,在踱为30的水中不负重游泳90min,休息60min后采血。大鼠采尾血,小鼠拔眼球采全血约0.5m1(不加抗凝剂)置4C冰箱约3h,血凝固后2000rmin离心15min,取血清备用。血清中的尿素在室温下可稳定24h,在4一6C可稳定7天以上。用二乙酰一的法测定。2.23.3.2试剂盒操作步骤(本推荐使用的试剂盒适用于手工操作)测定管标准管空白管尿素标准液(m1)0.02标本(m1)0.02二乙酰月弓应用液(m1)3.003.003.00氯化铁一磷酸应用液(m1)2.502.5
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