灭菌与消毒指示器材鉴定试验.docx
《灭菌与消毒指示器材鉴定试验.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《灭菌与消毒指示器材鉴定试验.docx(6页珍藏版)》请在第一文库网上搜索。
1、灭菌与消毒指示器材鉴定试验1压力蒸汽灭菌生物指示物鉴定试验1.1 目的测定压力蒸汽灭菌生物指示物所含菌量,以及在121C05C饱和蒸汽作用下的存活时间、杀灭时间与D 值是否达到要求指标。1.2 实验器材(1)压力蒸汽灭菌生物指示器材抗力检测器(biological indicator evaluator resistometer, pressured steam sterilization, BIER,下简称抗力检测器)。对抗力检测器要求的技术指标:时间控制以秒为单位;温度控制 以0.1C为单位;加热至预定温度的时间应WlOs;排气时间W5s;试验期间柜室内温度误差W0.5。(2)56C60C
2、 温箱。(3)澳甲酚紫蛋白腺培养液(嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基,见附录A)。(4)嗜热脂肪杆菌芽胞恢复琼脂培养基(见附录A)。(5)眼科镶子(夹取菌片用)。(6)磷酸盐缓冲液(PBS, 0.03 molL, PH 7.2)。(7)回收液(含0.1%吐温80的PBS液)。1.3 生物指示物微生物含量与抗力标准(1)嗜热脂肪杆菌(Bao7/5$b仪曲切叼?相/5人丁(:7953或55131)芽抱。回收菌量为5xl(Pcfu/片 5 1 ()6cfu 片,或 5x 105cfuml 5x 106cfuml。(2)在121C0.5C饱和蒸汽条件下,存活时间23.9min,杀灭时间W19min(3)在C
3、0.5C饱和蒸汽条件下,D值为1.3min1.9min1.4 生物指示物含菌量的测定随机抽取3个生物指示物样本。样本如为菌悬液式指示物,直接用PBS作适当稀释后,按2.L1.3规定 进行活菌培养计数即可;样本如为含菌载体式指示物(如菌片),应先置回收液中洗下芽抱,并以PBS稀释 至适当浓度,再进行活菌计数培养。培养温度为56C6(C, 24h观察结果。培养基仍用营养琼脂培养基。 检测菌量符合1.3者为合格。1.5 存活时间和杀灭时间的测定下以生物指示管的测定为例:(1)试验按作用时间分为3.9min和19min两组,各组测定20个样本。(2)先将抗力检测器的电热蒸汽发生器加满蒸储水,以不超过最
4、高水位为度。(3)接通检测器电源,预热,使达到预定蒸汽压。(4)设定灭菌温度(121C0.5C)和作用时间。(5)启动抗力检测器工作程序,使自动运行两个循环,以保证柜室等得到充分的预热。(6)将生物指示管(每批放20个样本)放专用载物架上并置抗力检测器柜室中,保证每个样本都可充分 暴露于蒸汽中。(7)关闭柜门,先设定一组所规定的灭菌时间。(8)启动抗力检测器工作程序,使自动进行抽真空一柜室加热一灭菌处理排气。(9)打开柜门,取出生物指示管。(10)紧接着重复(5)(9)的程序进行另一组的测定。(11)取出的生物指示管应尽快(勿超过2h)放入56C60C温箱,培养7d,观察最终结果。(12)测定
5、结果,39min组(存活时间组)20个生物指示管均有菌生长;19min组(杀灭时间组)20个生物指 示管均无菌生长时,可判为合格。其中一个组或两组各有一个样本未达规定要求,可再用4组样本重复试验 (3.9min和19min组各测试2次)。重复试验中,如各样本均达规定要求,仍可认为合格。对生物指示菌片测定时,操作程序与判断标准与上述生物指示管基本相同,只是将单片菌片装于牛皮 纸袋中,以防灭菌时被冷凝水浸湿。此外灭菌完毕,需将样本分别接种于澳甲酚紫蛋白陈培养液中培养,7d观察最终结果.1.6 D值的测定(1)随机抽取50个样本,在Omin20min范围内分成10个作用时间组进行试验。每组5个样本。
6、作 用时间递增幅度,可根据预备试验结果适当变动(最长时间必须达到使菌全部死亡的作用时间)。(2)将各组样本按1.5 (2)(10)所示程序,分次进行灭菌处理。(3)灭菌完毕,按1.4所示对各组样本随机抽取3个进行活菌培养计数。(4)计算每个作用时间样本上平均存活芽抱数的对数值。以作用时间为横坐标(X),存活芽抱数的对数值 为纵坐标(Y),算出芽抱存活与作用时间的回归方程(Y = a + bX)o(5)计算各实际测定值与直线回归方程的相关程度(相关系数)。(6)根据所得直线回归方程式,计算出减少90%芽胞数所需的作用时间(D值)。D值符合1.3者为合格。 1.7稳定性试验(1)在规定的贮存条件下
7、,存放足量产品。(2)按使用说明书规定的有效期限抽样检测,先观察外观,特别注意指示剂中的培养液颜色有无变化。(3)在外观正常情况下,进一步按1.4、1.5所示方法测定活菌数量、存活时间、杀灭时间。菌量数下 降50%,存活时间和杀灭时间又在规定合格范围内(见1.3)者,该贮存期可视为产品的有效保存期。1.8 注意事项(1)测定生物指示剂的抗力时,必须用压力蒸汽灭菌生物指示剂检测器进行,不能用普通压力蒸汽灭菌 器代替。(2)使用抗力检测器进行测定时,为确保每次加热时间的一致,每次间隔时间不宜超过100s。如时间过 长,柜室必须重新预热。(3)培养基性能对热损伤后的芽泡恢复有一定影响,试验时不能用普
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 灭菌 消毒 指示 器材 鉴定 试验
