CAR-T细胞研发生产车间布局及环境要求.docx

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1、CAR-T细胞研发生产车间布局及环境要求近几年，肿瘤发病率和死亡率持续增高，预计后续肿瘤发病人数还会增加，之前国外单抗药物主导市场，随着细胞免疫治疗技术的不断完善，细胞免疫治疗有望成为完全消灭癌细胞的技术，成为引领肿瘤技术未来发展的方向。随着癌症治疗检测技术不断提升,新靶点、新机理不断发现，各类免疫治疗快速发展，CAR-T疗法更可谓其中佼佼者。今天我们以EPC工程（总承包）集成服务商CEIDI西递某项目为例，具体谈谈CAR-T细胞制备车间净化工程。CAR-T细胞研发生产的流程如下：1、采集接收外周血2、分离单个核细胞（PBMC）3、按比例稀释外周血，混匀。4、将稀释好的血样缓慢加入室温的人淋巴

2、细胞分离液的离心管中离心。离心完成后，离心管出现明显分层由下至上:红细胞层，粒细胞层，Fico11层，单个核细胞层和血浆层。吸取血浆层至距白膜层左右处弃之。小心吸取红细胞层以上的所有液体至离心管中，稀释,混匀。离心，重悬细胞混匀，取少量细胞计数。5、离心，上清液送检无菌检测。细胞培养，细胞碎片及杂质情况，每2-3天加液培养。根据细胞状态和临床治疗需要，培养至细胞数量达到要求,各项检测合格。包括:无菌检测，内毒素检测，细胞活力，细胞表型等。6、5Car-T细胞收集:确认细胞各项检测己符合要求。根据治疗方案（一般一个疗程分多次回输,间隔时间为1天），取出相应细胞悬液，剩余细胞补加培养基继续培养，供

3、再次回输。细胞悬液转入离心管中，离心。除去上清培养液，加缓冲液稀释混匀，离心，弃上清。根据CAR-T细胞研发生产特点，CE1D1西递设计师将车间工艺总体分为生产区、动力区、核心生产区、质检区。核心生产区包括样本登记预处理区、细胞制备区、试剂配制区、成品冻存区、废弃物处理区。CAR-T细胞的制备全过程因为不可除菌过滤，每个制备单元需要设计独立的B级净化空调，每个制备单元制备完一人份后需要对空调系统进行彻底消毒后才能进行下一人份的生产，为了提高制备单元的利用率，空调系统需要设置2种模式：生产模式和消毒模式，生产模式是回风运行，消毒模式是全排风，迅速排出消毒气体，缩短消毒时间。辅助生产区主要为核心生

4、产区B级区提供辅助功能，包括B级区人员更衣通道，一次物料的传递，环境清洁与消毒所需的试剂配制，B级区洁净服的清洗与灭菌等。辅助生产区如洁净走道、污物走道以及其他辅助房间设计为C级，与每个制备单元通过气闸连接，可以降低生产运行成本。动力区主要包含空调系统，气瓶间，纯化水系统，配电系统。质检区主要是CAR-T的放行检测，包括生化检测、微生物检测、细胞学检测。生化检测实验室主要使用了PCR仪等设备，用于CAR-T的鉴别和纯度检测。人物流设计中，人员通过车间西北侧楼梯进入二层，在二层设置人员更鞋、总更衣，人员经总更后,进入细胞与基因治疗研究中心，一般生产区人员直接进入一般生产区各生产岗位；洁净区人员需

5、再经过换鞋脱外衣洗手、穿洁净衣手消毒等方可进入生产区，疏散设置相应的安全门。空调系统一共分为三个系统:普通生产区（CNC）.辅助生产区（C级）.核心生产区（B级）。洁净区一般设计温度18C26C.相对湿度45%65%。相邻的不同洁净级别的房间的压差应保持在ISPa（门关的状态）。有洁净级别的房间与室外的压差应大于等于15Pa0相同洁净等级的房间将在相对洁净的房间到其它房间维持SPa的正压，以保证污染从相对洁净的房间到相对非洁净的房间。空气处理方式:新风与回风经空调箱初效，中效过滤后，经高效送风口送入室内。B级区采取CAVVAV方式稳定控制压差。气流组织为:洁净区为上送下侧回，CNC区为上送上回。CAR-T细胞研发生产对环境的要求严格，对温湿度、压差及气流组织等都有明确要求，所以承建时选择合适的单位非常重要，EPC集成服务商CE1D1西递在洁净工程领域已钻研十余年,为众多生物医学企业提供了优质的服务，能够为生物药品的生产提供合适的方案设计，有需要的企业可以登录上海西递实业有限公司官网咨询了解。