N-MIDn 骨钙素标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第1页，共4页用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的N-MID骨钙素（osteocalcin）。可用于骨质疏松症或血钙增高症患者作抗再吸收治疗效果的监测。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsysl010和2010免疫测定分析仪。概述：骨钙素是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K,同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。骨钙素产生后一部分吸收进入骨基质，另一部分释放

2、进入外周血。因此，血清（或血浆）中骨钙素的含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。骨钙素含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进以及Paget病等疾病中。目前，骨钙素已被视为骨转换标志物，用于对上述疾病进行抗再吸收治疗效果的监测。完整的骨钙素（氨基酸厂49）及大的NMID片断（氨基酸143）均存在于血液中。完整的骨钙素在外周血中不稳定，翔基端43-44间的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下来的N一MID则稳定得多。Elecsys N-MID骨钙素测定方法采用了针对骨钙素N端片段和N一MID片段上的决定簇的二株单克隆抗体。因此能够检测血清（或血浆）中稳定的NM1D片段和尚未被分解的完整的骨

3、钙素。与不稳定的C端片段（氨基酸4349）没有关系，从而确保在常规实验室条件下获得稳定的检测结果。原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20ml标本、生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗N-MID骨钙素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪

4、器的原版标准曲线而得。试剂:M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度072mgl,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度L5mgl,磷酸缓冲液0.01oll, pH6.0o含防腐剂。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第2页，共4页R2： Ru(bpy)32+化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体(黑盖)，1瓶,10ml,浓度L3mgl,磷酸缓冲液0.lmoll, pH6.0o含防腐剂。储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，

5、可稳定至标明的保质期。开封后，2 8度12周；放在Elecsys2010上,8周；(使用后放回2-8度；如置20-25度，约20小时)。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：Li-肝素、EDTA-K3抗凝。注意：避免溶血，因为血细胞含有的蛋白醵可分解骨钙素。建议立即离心血标本。稳定性：血清或肝素抗凝血浆在15 25度可稳定8小时，2 8度可稳定3天，一20度可稳定3个月。只能冻融一次；EDTA抗凝血浆在15 25度可稳定2天，2 一度可稳定3天，-20度可稳定3个月。只能冻融一次。沉淀的标本使用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。检测步骤：提供的材料：货号：2149133, 100

6、人份的Elecsys N-MID骨钙素试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗N-MID骨钙素抗体 R2三联毗咤钉标记的抗N-MID骨钙素抗体需要的材料(未提供)： Elecsys N-MID骨钙素定标液(N-MID osteocalcin CalSet)货号 1972111 Elecsys 骨标志物质控品(PreciControl Bone) 1, 2和3货号 1972227 Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell)货号 1662988 Elecsys测量池清洗液(CleanCell)货号 1662970 E

7、lecsys清洗添加剂液(SysWash)货号1930346 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 1298500 Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159 Elecsys 2010反应杯(Assay Cup)货号 11706802 Elecsys 2010吸样头(Assay Tip) 货号 11706799ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-38N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第3页，共4页方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的

8、特异性参数，不需手工输入如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。定标：每批N-MID骨钙素试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用N-MID骨钙素CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测

9、值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。计算：对每一个标本，仪器会自动计算N-MID骨钙素含量，单位是ng/ml。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素65mgdl）、脂血（脂质1500mgdl）和生物素G00ngml干扰。受溶血干扰，血细胞含有的蛋白酶可分解骨钙素。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2200Uml）。16种常用药物经试验对本测定无干扰。N-MID骨钙素浓度高达4200ngml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。Elecsys N-MID骨钙素测定结果应结合

10、病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。检测范围：0.500300ngml文件编号：ABCD-02-38ABCD医院免疫实验室N-MIDn骨钙素版序：ABCD页码：第4页，共4页稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:5稀释。稀释后的标本NMID骨钙素含量必须高于60ngl。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。正常参考值：例数N-MID骨钙素第50百分位5-95百分位健康妇女绝经期前20岁绝经期后骨质疏松患者正常男人18-29岁10810212023272711-4315-4613-4830-50岁51-70岁如有必要,18317912540252424-7014-4214-46各实验室应自己测定一个正常值范围。