TGXAS-桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程编制说明.docx
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1、团体标准桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程编制说明-征求意见稿一、项目来源根据广西标准化协会关于下达2023年第八十批团体标准制定项目计划的通知(桂标协(2023)196号)文件精神,由广西壮族自治区蚕业技术推广站提出,广西壮族自治区蚕业技术推广站起草的团体标准桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程(项目编号:2023-8005)o二、项目背景和目的意义我国是世界蚕业起源中心,也是世界上桑树种质资源最为丰富的国家。广西又是全国蚕桑第一大省。广西于2005年起蚕茧产量成为全国第一大省,2006年起桑园面积成为全国第一大省(区)。20162023年,全区桑园面积基本稳定在300万亩,占全国桑园面积
2、的25%左右。蚕茧产量40万吨,年蚕茧产值平均值为157.5亿元,连续16年位居全国第一。蚕桑产业已成为农民增收、农业增效和促进社会主义新农村建设、构建富裕文明和谐新广西的一大亮点,极大促进了广西乡村振兴和精准扶贫。而桑树青枯病却严重阻碍着广西桑树产业的发展。桑树青枯病、赤锈病以及菌核病等严重危害着蚕桑产业的发展。选育抗病品种是防止桑树染病的有效措施,而抗病育种成败的关键则是抗性基因的挖掘及其功能研究。与此同时,桑树产业的发展必须解决好保护现有耕地以及与粮食种植争地的问题。广西是中国喀斯特地貌的典型地区,喀斯特地貌面积约占广西总面积的37%,由于桑树良好的生态适应特性,使得在喀斯特地貌地区等干
3、旱、盐碱地和石漠化地区栽培桑树成为可能及,如此不但能有效地保护现有耕地,而且也能获得良好的生态经济效益。因此对桑树耐旱、耐盐碱关键基因的挖掘及,将有助于进一步拓宽桑树的种植面积,进一步促进广西桑树产业的提质增效。综上,需要一种快速检测桑树抗性基因功能的方法。实时荧光定量技术是实时荧光定量PCR(rea1timef1uorescencequantitativePCR,qPCR)是1996年由美国App1iedBiosystems公司推出的一种新的定量技术,将荧光标记物加入体系,PCR扩增的同时,荧光标记物也同比例扩增,通过仪器读取整个时期荧光信号强度即可了解产物的实时扩增情况,并对待测样品的初始
4、模板进行定量或定性分析。韦燕梅等利用荧光定量PCR分析了%初外基因在高温、低温、高盐和干旱等非生物胁迫下的转录水平,结果表明论初的宓基因均有响应,其中对低温胁迫诱导最为显著,表达量为对照的40倍左右。研究结果为进一步研究桑树扬初以基因的生物学功能及桑树的抗逆机理提供了帮助。本标准规定桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程的术语和定义及RT-PCR检测方法,对抗病及抗旱等抗逆性强的桑树品种分子选育提供一定指导意义。受气候、技术、市场、环境等因素的影响,我国蚕桑生产依然面临着家蚕微粒子病、桑树病虫害、自然灾害等因素所造成的生产风险。通过传统育种方法和现代分子育种技术相结合,开展优质、高抗等桑树品种选
5、育。利用荧光定量PCR技术可以快速分析不同逆境胁迫下基因的表达差异,能够快速了解基因的初步功能,对桑树的分子育种提供了基因源及研究方向。但是有关桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程目前尚没有国家标准和地方标准,为了规范桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程,确保快速、高效的桑树基因功能检测技术,促进桑树抗逆品种选育,我站申请制定桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程。三、项目编制过程(一)成立标准编制工作组团体标准桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程项目任务下达后,广西壮族自治区蚕业技术推广站成立了标准编制工作组,制定了标准编写方案,明确任务职责,确定工作技术路线,开展标准编制工作,具体标准编制工
6、作由广西壮族自治区蚕业技术推广站相关人员配合。(二)收集整理文献资料编制工作小组成员根据任务分工进行了资料收集和调查研究分析,一是收集国内国外相关的法律法规和技术标准,了解逆境胁迫下桑树功能基因荧光定量RT-PCR检测技术等方面的相关资料;二是组织技术人员到相关企业、科研院所进行实地考察,了解并掌握当前RT-PCR检测技术的情况,提高标准的适应性和普遍性,为我区菜用桑种植普遍适用的技术依据。标准编制工作组收集了国内有关桑树功能基因荧光定量RT-PCR检测的相关技术文献资料。主要有:DB14/T1414桑树播种育苗技术规程DB21/T2395-2015稻蕴病菌无毒基因检测PCR法DB21/T23
7、96-2015水稻品种抗稻瘟病基因检测PCR法DB37/T1019-2008大豆及其制品中抗草甘瞬转基因成分的实时荧光定量PCR检测方法DB45/T86-2003桑树栽培管理技术规程DB53/T944-2019甘派抗褐锈病基因Bru1的PCR检测技术DB65/T4215桑树育苗技术规程S/T2271-2009青椒中专基因成分定性PCR检测方法(三)研讨确定标准主体内容2023年11月,广西标准化协会下达关于下达2023年第八十批团体标准制定项目计划的通知(桂标协(2023)196号)文件,根据文件精神,桑树荧光定量RT-PCR检测操作规程立项(项目编号:2023-8005)o2023年1-3月
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