清金保肺汤联合针灸辅助治疗非小细胞肺癌的临床及网络药理学研究.docx
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1、清金保肺汤联合针灸辅助治疗非小细胞肺癌的临床及网络药理学研究凌绵聪樊伟 熊婷 王天磊 潘嘉欣莫燕丽刘建浩(摘要)目的探前清金保肺汤联合针灸辅助治疗非小细胞肺癌(non-smalIcel 1 lungcancer, NSCLC)的临床效果,并借助网络药理学方法建立清金保肺汤多成分-多靶点-多通路的中药复方调控网络与关系网络,结合小鼠实验验证其对于NSCLC的作用机制。方法选取三亚市中医院2022年1月至2022年12月收治的NSCLC患者80例作为研究对象,分为对照组40例(常规治疗)与观察组40例(在对照组基础上应用清金保肺汤联合针灸治疗),治疗1个月后观察两组治疗效果及评估两组不良反应,监测
2、淋巴细胞亚群百分比及绝对计数的变化情况。通过GEO数据库筛选肺癌肿瘤样本与正常样本的差异基因;运用中药系统药理数据库搜索清金保肺汤药物有效活性成分以及药物作用靶点,运用Cytoscape3. 7. 2软件构建成分-靶点基因网络和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用R语言进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析、基因本体论(G0)富集分析。采用NSCLC细胞株A549右腋下接种建立NSCLC荷瘤模型,蛋白质免疫印迹法对网络药理学筛选的关键作用靶点进行验证。结果观察组有效率显著高于对照组(P6个月的NSCLC患者,排除妊娠期或哺乳期妇女和患有血液系统疾病、严重心肝肾功能不全及
3、精神疾病者。应用随机数字表法将患者分为对照组(40例,常规治疗)和观察组(40例,在对照组基础上应用清金保肺汤联合针灸治疗),两组患者性别、年龄、体质量一般资料比较,差异无统计学意义(P0.05)(见表1),本实验通过三亚市中医院伦理委员会批准(伦理号:ZYYLL202202223)o1.1.2治疗方法(1)对照组对症应用常规化疗治疗,静脉滴注顺的(75mg/m2)o (2)观察组在对照组基础上应用清金保肺汤联合针灸治疗。清金保肺汤组方:麦冬(去心)6g,桔梗9g,天冬(去心)9g,黄苓9g,荆芥9g,知母9g,杏仁6g,天花粉12g,玄参12g,牛芽子9g,五味子4g。文火煎熬40min,水
4、煎液500mL,早晚服用,1剂/d。针灸:选取患者压痛点和天泉穴、风门穴、肺俞穴、尺泽穴、膏肓穴、心俞穴、中府穴进行针灸,每次留针30min, 1次/d。观察两组治疗1个月后的治疗效果。1.1. 3观察指标临床疗效评定包括治疗效果评估、不良反应评估和免疫功能评估。(1)治疗效果评估:以随访1个月内肿瘤病灶缩小程度作为评判指标。进展(progressdegree, PD):肿瘤病灶未缩小或面积扩大表示恶化;无变化(nochange, NC):肿瘤病灶发生缩小但缩小未超过50%表示稳定;部分缓解(partrelief, PR):肿瘤病灶缩小超过50%,随访1个月内未发生复发情况表示部分缓解;完全缓
5、解(completerelief, CR):肿瘤病灶完全消失,随访1个月内未发生复发情况表示完全缓解。(2)不良反应评估:主要观察患者恶心、呕吐、白细胞降低的发生情况。(3)免疫功能评估:选用四色淋巴细胞亚群分析试剂盒(美国BD公司),使用FACSCantoH流式细胞仪(美国BD公司),检测外周血中淋巴细胞亚群CD3+、CD4+细胞、自然杀伤(naturalkillercell, NK)细胞、B细胞百分比及绝对计数。L 1.4统计学方法采用SPSS20.0进行统计分析,计数资料采用“例(%) ”表示,行x2检验,以P30%)和类药性(DL0.18)筛选清金保肺汤组方中各味中药的活性化合物。1.
6、2.3 清金保肺汤有效成分的靶基因和肺癌差异交集基因通过用清金保肺汤有效成Perl (http: /Strawberryperl, com/)软件,分的靶基因在肺癌的差异基因中进行筛选,以便得到有效成分与部分差异基因的对应关系。1.2.4 中药复方调控网络的构建借助Cytoscape3. 7. 2(thecytoscapeconsoritum, http: /cytoscape. org) 软件构建清金保肺汤与肺癌的“有效成分-靶点-疾病”交互网络。1.2.5 交集基因的蛋白相互作用核心网络(protein-proteininteractions, PPI)的构建使用 Cytoscape3.
7、7. 2软件中的Bisogenet插件进行PPI网络绘制。结合Cytoscape3. 7. 2勒:件中的CytoNCA插件对PPI网络进行网络拓扑结构分析,筛选标准为选择节点度值(degreecentrality)大于61,构建一个子网络;接下来以介数中心度(betweennesscentrality)大于100为筛选标准,构建另一个子网络。1.2.6 6基因功能富集(G0)及通路富集分析(KEGG)利用R软件,选择生物过程(biologicalprocess)、细胞组分(cellularcomponent)和分子功能(molecularfunction) 3 个模块进行基因功能富集分析;利用
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