防龋DNA疫苗pVAX1-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究.docx

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1、I防弱DNA疫苗pVAX1-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究I邹潇龙I王月月2,吴砧冰3,犹然淞4,周民希陈彬（1.遵义医科大学口腔疾病研究特色重点实般室,贵州遵义5630062.遵义医科大学附属口腔医院，贵州遵义5630）I摘要I目的：本研究在SD大鼠不同生理阶段以及免疫条件下分析乳腺FCRn基因mRNA表达量的变化，探索防隔DNA疫苗PVAX1SG对大鼠乳腺FCRn表达的影响，方法：将40只雌性受孕SD大鼠随机分成四蛆（防般DNAI5苗组，空戟质粒蛆，生理盐水组，空白对照组），在其分娩后第I天及第1周分别用对应试剂进行注射，第2周处死SD大鼠并取乳腺迸行mRNA检测.结果：经防踽DNA

2、疫苗pVAX1SG免疫后的大鼠乳腺FCRn基因表达量较正常组大鼠乳腺FCRn基因表达量显著上升（pBinI*.（I.Key1aboratoryOfOra1DiseaseReseanh,ZunyiMedica1University,Zunyi563006,China：2.Affi1iatedStomato1ogica1Hospita1ofZunyiMedica1University,Znnyi563000,China）AbstractObjectivesHerein,inordertovxp1rctheeffectsofanti-cariesDNAvaccinepVAX1-SGontheexpr

3、essionofnits批注IAW请补充：第一作者：姓名（年份），性别，职称，主要研究方肉通讯作者；姓名（年份），性别，职称，主要研究方向tE-mai1TTt投稿论文的题目、摘要、关健词、图题、表题、图注、表注以及中文参考文献必须有中英文对照（中文汇献、二；娈翻译的（本身就有英文翻译的再翻译，本身无英文翻译的保留中文就可），请先列出英文同译后是中文批注A2:知网13.4%万方37.82%.文章现制率较高请修改至20以下，引用他人文字部分可换种表达方法，或者正文相应增加些内容，复制率均可下降,如要自行查受制率请剔除摘要和文献.只杏正文部分breastFcRn,thechangesofmRNAex

4、pressionobreastFcRngeneinSDratsWereana1yzedatdiferentphysio1ogica1stagesandunderimmuneconditions.Methods40fcma1c-conceivedSDratxwererandom1ydividedintofourgroupswhichwereIabc1santi-VariesDNAvaccine,emptyp1asmid,physio1ogica1saiincwandb1ankcontro1groups.Atthefirstday.thestudiedrateswereimmunizedwithc

5、orrespondingreagents,respective1y.Subsequent1y9afterthede1iver)forIweek,theSI)ratswereexecutedandthemammaryg1andwastakeninthesecondweekfordetection.Resu1tssTheexpressionofFcRngeneinthemammaryg1andsafterimmunizationwiththeanti-cariesDNAvaccinepVAX1-SGassignificant1yhhcrthanthatofthenorma1g)pofrats(p0

6、.05).Conc1usionsTheanti-cariesDNAvaccinepVAX1-SGcanincreasetheexpressionofFcRninratsInHInmaryg1ands.Keywords)nti-cariesDNAvaccine;BreastFcRnzImmuneexpression;FcRn是一种位于细胞膜表面的IgG抗体受体,其蛋白结构和MHC-I分子类似,主要在内皮细胞中表达，其结构包含由链和。2微球蛋白组成的异二聚体FcRn可以和IgG的Fc部分结合，阻止IgG分子被溶酶体裂解，可以起到增长IgG体内半衰期的作用，参与到IgG的体内转运、维持和分布代谢过程

7、中U1FCRn作为将IgG从母体传递到幼崽体内的特异性载体，Wa11aCe和ReeS在啮齿类动物刚出生的幼崽小肠上皮细胞刷状缘上首次分离得到。FCRn在许多成年哺乳动物的呼吸道、消化道和生阳道的黏膜上皮细胞及肺脏、肝脏、肾脏、胎盘及乳腺等组织都有表达a”FCR11与IgG在酸性环境中结合，在中性环境解离，其相互作用具有PH值依赖性二因此，IgG从组织间隙液中流经乳腺上皮细胞过程中,在腺泡上皮细胞的基底侧与酸性环境中的FcRn结合,经胞吞转运释放到腺胞腔中。防僦DNA疫苗免疫后产生的抗体在许多哺乳动物比如小鼠的肾脏、肝脏、血管内皮细胞等组织器官都有表达网。FCRn在不同动物中传递母体IgG的途径

8、不同。比如：在人和兔子中主要通过胎盘内转运母体的IgG分子，在乳汁中则几乎不含IgG;在啮齿类动物中一部分可以通过胎盘中的FcRn转运母体IgG分子，部分可以通过乳腺中的FcRn转运IgG.FCRn可以调控血清中IgG的浓度，当IgG少的时候，与IgG结合可以保护其不被体内溶菌满降解，延长IgG的半衰期I。1益金项目I步州有普通ItJi等学校青年科技人才成长项目（髀科鲁KY字20231276号九贵州省普通四等学校为年科技人才成长项目黔科合KY字2O22289号1费州省卫生做康委科学技术珞金项目iUKngu1）14J837XM62QI7Q9J61.3 RNA提取、测序、分析一每个样本编号，按照R

9、NA提取试剂盒说明书分别提取总RNA。使用Agi1ent公司21型生物分析仪配试剂盒（AgiIen1RNA6000NanoKit）检测总RNA的浓度、28S/18S值、RNA完整值（R1N）以及片断大小。每个样本总RNA单独建麻，构建好的文库用Agi1cnt21Bioana1yzcr和ABIStcpOneP1usRea1-TimePCRSyStem质检合格后进行ReSeqUenCingI11uminaHiSeq2000测序。过滤掉低质JR、接头污染以及未知碱基N含量过高reads（SOAPnuke-V1.5.2）.获得高质量数据后，比对到人参考基因组上（HISAT2-v2.04）,然后用Str

10、ingTie对每个样品分别进行转录本的重构，用Cuffmerge将所有样品的重构信息整合在一起，对整合后的数据再使用CUffcOmPare采集、比较和整合。2.1 pVAXI-SCi质粒提取及测序殴证将提取的质粒送SangOnBi。IeCh测序，结果如图1所示，序列峰图清晰有序，主峰明显，由于一个测序反应只能测到IooObP左右，pVAX1-SG的两个重要毒力功能区SpaP/A-CAT基因大小为1.8kb。对于PCR样品测序结果测到PCR终止末端的A减基，显示测序结果正常100%,真实可信（如图1）。图1pVAXI-SG质粒测序结果Fig.1Sequencingresu1tsofpVAX1-SGP1aSmid2.2 实险样本的采集在免疫后7天采集乳腺（乳头周围ICm的范围，包埋于皮下组织中）后生理盐水冲洗，装入无菌、无醉EP管，并放入液缸速冻后80CC保存（图2和图3）。图2经肌肉注射DNA疫苗免疫SD大鼠Fig.2ImmunizationofSDratsbyintramuscu1arinjectionofDNAvaccine图3采集SD大鼠乳腺组织F.3Co11ectSDratsbreasttissue2.3 组织样本RNA检测结果采用Nano