移液器使用标准操作规程.docx

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1、所属类别：稳定细胞株部文件编号：ACR0/QMS/S0P/SCL-09文件名称：移液器使用标准操作规程生效日期：2017. 2. 28编制：张雪瑶 编写日期：2017.2.21批准人职位：部门主管 批准人：批准日期：2017. 2. 28文件类别：SOP页数：13版本号：1.3控制级别：控制文件1目的规范实验室技术人员移液器使用方法，降低不规范操作造成的实验误差，减 少错误操作造成的移液器损坏，规范移液器的维护和保养。2适用范围质量分析部所有员工3移液器工作原理3.1 气体活塞式(Air-cushion)Air displacement移液器的工作原理是活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液。

2、在活 塞推动下，排出部分空气，利用大气压吸入液体，再由活塞推动空气排出 液体。使用移液器时，配合弹簧的伸缩性特点来操作，可以很好地控制移液 的速度和力度。Positive displacement3.2 外置活塞式(Positive-displacement)通过分液管或吸头内活塞的连续运动移取和打出液体，活塞和液体直接接触，没有空气柱，适用于密度、黏度与水不同的液体，如易挥发性溶液、 粘稠液体等。4移液器的基本知识4.1 基本概念4.1.1 移液器量程移液器可以吸取溶液的范围，通常会标示在移液器上和说明书上常见的量程：0.1-2.5 L , 0.5-10 L, 2-20 L, 5-50 L,

3、 10-100 L, 20-200L, 100-1000 L , 1000-5000 L4.1.2 配备枪头主要有三种蓝枪头(IOoO L),黄枪头(200 L),普通白枪头(10L) 还有其他的特殊枪头，比如长白枪头(10L)和5 mL枪头蓝枪头-IOOO L移液 器；黄枪头-200 L移液器或者10 L移液器(不建议使用)，白枪头-10 L移液 器4.1.3 移液器品牌德国艾本德(EPPENDORF )；芬兰雷勃(FinnPiPette),瑞士哈美顿(Hamilton), DRAGONMED (大龙)等。4.2 移液器量程选择4.2.1 移液器的选择根据所需移液的体积来选择适合的移液器。拿

4、起移液器后第一步先确认移液 器的量程，比如拿起一个200 L的移液器，先看其量程为20-200 L,那么在调 节取液范围的过程中，应该注意不要超过移液器的量程。注意事项:移液器的选择尽量选择小量程移液器,比如移液200 L选择200 NL的移液器,而不选择Iooo L移液器;移液20此选择2-20L移液器,不选择 20-200 L移液器,这样可以确保移液量的精确。4.2.2 量程的调节正确的容量设定分为两个步骤，一是粗调，即通过排放按钮将容量值迅速调 整至接近自己的预想值；二是细调，当容量值接近自己的预想值以后，应将移液 器横置，水平放至自己的眼前，通过调节轮慢慢地将容量值调至预想值，从而避

5、免视觉误差所造成的影响。从大体积调为小体积：按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可;从小体积调为大体积：设定所需要的容量时应调整到大于设定容量值的1/4 圈，再调至设定值，这样可排除机械间隙，使设定量值准确，即先将容量调节钮 旋转超过目的容量值的1/4圈，再向下调至设定值，调到移液器最大量程时例 外（见图1）。注意事项：任何时候不得调出移液器的最大量程和最小量程。4.2.3 枪头（吸液嘴）的装配单道移液器：将移液枪（器）垂直插入配套枪头中，在轻轻用力下压的同时， 把手中的移液器按逆时针方向旋转180度。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸 头的方法来进行安装。多道（如8道或12道）移液枪：将移液枪

6、的第一道对准第一个枪头，然后倾 斜地插入，往前后方向摇动即可卡紧。枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可 以看到连接部分形成清晰的密封圈。（见图2）注意事项:在将枪头（pipette tips）套上移液枪时,很多人会使劲地在枪头 盒子上敲几下,这是错误的做法,因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧） 因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散,甚至会导致刻度调节旋钮卡住。5移液器使用过程任何一个完整的移液循环，包括吸头安装容量设定预洗吸头吸 液放液卸去吸头等六个步骤。每一个步骤都有需要遵循的操作规范。5.1 安装吸头和量程调节见422和4.2.35.2 预洗吸头在我们安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该

7、把需要转移的液体吸取、 排放2到3次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精 度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。其次，在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在白套筒室内形成负压，从而产生漏液的情况，这时就需要我们预洗四到六次，让白套筒室内的气体 达到饱和，负压就会自动消失。5.3 吸液连接恰当的吸嘴/按下排放控制钮至第一档/将移液器吸嘴垂直进入液面下l-4mm （浸入过深的话，液压会对 吸液的精确度产生一定的影响，当然，具体的浸入深度还应根据盛 放液体的容器大小灵活掌握）：0.1-10 L容量的移液器进入液面下 l-2mm; 2-200 L容量的移液器进入液面下2

8、-3mm； 200-1000L容 量的移液器进入液面下3mm； 1-5 mL容量的移液器进入液面下 3-4mm;注：为使测量准确可将吸嘴预洗3次，即反复吸排液体3 次/平稳松开按钮，使控制钮缓慢滑回原位,移液器移出液面前略等待1-3秒。1000 L以下停顿1秒;5-1OmL 停顿2-3秒/缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体5.4 放液/将吸嘴以一定角度紧贴容量内壁,缓慢将控制钮按至第一档并等待约13秒/将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净/慢放控制钮5.5 卸去枪头/按压弹射键弹，枪头方向需要对着安全无人的方向（防止不小心伤 到人），射出吸嘴至指定回收处，卸掉的吸头一定不能和新吸头混 放

9、，以免产生交叉污染5.6 两种移液方法移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。吸取液体时，移液器 保持竖直状态，将枪头插入液面下2-3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体 以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。这时可以采取两 种移液方法。5.6.1 正向移液法正向移液法：用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。 接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的 液体。最后松开按钮（见图4）5.6.2 反向移液法反向移液法：先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按 至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一

10、停点（千万别再 往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。（见图5）此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体, 其原理就是先吸入多于设置量程的液体,转移液体的时候不用吹出残余的液体。5.6.3 高粘液体的吸取办法当吸取高粘度的液体（吐温，甘油等），需要将枪头平剪掉1-2毫米，再安 装到移液器，吸液时需要放慢速度至平时的1/5倍或者更慢，边缓慢放控制钮， 边观察液体液面上升过程，直至液面不再上升，方可拿出移液器。若移液器无法准确吸取溶液,需要结合天平按照对应体积的重量去取所需的液体。5.7 移液器的正确放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪 头

11、里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧，且 需要立即对移液器内的溶液进行专门清理，防止移液器损坏。5.8 器故障排除（两分钟检查法）达到快速判断我们手中的移液器是否处于一种正常的工作状态的方法。6.1 测漏我们手中的移液器叫空气排代式移液器，如果出现漏气的情况，那我们的取 样结果就肯定不会准确，这将直接影响到我们实验的最终结果，后果是比较比较 严重的。那么，如何判断移液器是否漏气呢？首先，取一个透明的容器，装上水，将需要测试的移液器装上吸头，吸上水， 如果是P2、PIO. P20、PlO0、P200的移液器，请将吸头浸入液面12毫米， 静待20秒，观察吸头内部液面是否

12、下降，如果下降了，就说明您手中的移液器 出现了漏气的情况；如果是PlO00、P5000. PlOML的移液器，请将吸头朝下悬 垂20秒，观察是否有液体下滴，如果有，说明您手中的移液器也出现了漏气的 情况。6.2 查找故障原因首先，检查吸头安装是否到位，换掉吸头再次测试，以排除因吸头的关系产 生的漏气情况；接着，检查白套筒的端口部份（即白套筒与吸头接触的部份）是 否有刮痕；然后，再检查白套筒与手柄之间的连接螺帽是否松动。如果这些情况 都没有，就说明密封圈或活塞组件有损坏，请您跟厂家取得联系。6.3 检查外观按动排放按钮，感觉是否顺畅，听是否有噪音，观察排放杆是否有弯曲；旋 转调节按钮，观察计数器

13、的读数是否有偏差6.4 的操作方式令错误1：装配吸头时，用移液器反复撞击吸头,正确：插入吸头，左右轻转旋转上紧吸头令错误2：吸头与移液器不匹配，影响气密性,正确：选用与移液器匹配的，有质量保证的吸头 令错误3：吸头内含有未打出的液体时，移液器平置于桌面,正确：确保枪头移除，再将移液器垂直挂在移液器支架上。在任何 条件下均不允许将装配了移液器枪头的移液器长时间放置在桌面 或移液器架子上。错误4：用大量程的移液器移取小体积的液体,正确：移液体积需保证在移液器所提供的量程范围之内才符合不 准确度和不精确度的要求错误5：吸取具有强挥发性的液体,正确：如果一定要移取强挥发性的液体，应该在移液结束后立刻

14、拆开移液器，让蒸汽挥发令错误6：吸液速度和放液速度过快,正确：慢吸慢放8维护保养/如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物/移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，使弹簧处于松弛状态以 保护弹簧，且将移液器垂直放置在移液器架上/定期清洁我们手中的移液器，用酒精棉即可，主要擦拭手柄、弹射器及白套筒外部，既可以保持美观，又降低了对样品产生污染的可能性/根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用60 %异丙醇消毒, 再用双蒸水清洗并晾干/在吸取过高挥发、高腐蚀液体后，应将整支移液器拆开，用蒸储水冲洗 活塞杆及白套筒内壁，并在晾干后安装使用。以免挥发性气体长时间吸 附于活塞杆表面，对活塞杆产生腐蚀

15、，损坏您的移液器。/需要高温消毒的移液器应首先查阅所使用的移液器是否适合高温消毒后 再行处理 校准是可以在20-25度环境中，通过重复几次秤量蒸储水的方法来进行/避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准/发现问题及时找专业人员处理9常见问题以及解决方案问题原因解决移液性能规格超出给定 范围使用了不合适的吸头用原厂的吸头测试非标准测试条件或校准改变根据ISO 8655标准进行测试，必要时再校正移液器没有定期保养进行常规维护并在测试安全圆锥过滤器污染更换安全圆锥过滤器移液器渗漏见一下说明移液器渗漏使用了不合适的吸头用原厂的吸头吸头安装不正确稳妥安装吸头吸头圆锥磨损货污染清洗安全圆锥更换安全圆锥活塞密封磨损或润滑剂不足清洗并给垫圈重上润滑剂更换垫网仪器损坏送去维修操作按钮卡住或无法固 定液体已经通过吸头圆锥并在移液器内部变干清洗活塞/密封处和吸头圆锥并上油安全圆锥过滤器污染更换安全圆锥过滤器润滑剂不足相应上润滑剂移液器阻塞，洗液容量太小液体已