国家自然基金申请书写作：蛋白检测篇3-免疫荧光技术.docx

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编号：1-3主题：免疫荧光技术（Immunof1uorescencetechnique）概述：免疫荧光技术（Immunof1uorescencetechnique）又称荧光抗体技术，它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。目的：测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。步骤：1、细胞准备；2、固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞，固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4。C保存3个月；3、通透。使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。4、封闭。使用封闭液对细胞进行封闭。5、一抗结合。室温孵育Ih或者4。C过夜。6、二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。7、封片，荧光显微镜检查。直接荧光抗体染色法示意图间接荧光抗体染色法示意图

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