KJWI-QA-26霉菌和酵母菌计数.docx
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1、文件修改记录版本修订次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号:(仅适用于控制文件)(仅盖有红色印章的文件才有效)1o目的1.1规定食品中毒菌和醉母菌计数的方法。2.0适用范围2.1适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数。3.O职责微生物检验员负责按作业指导书进行检验。4.0术语(无)5.0工作流程图见附录A中A.16.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:6.1.1冰箱:25C。6.1.2恒温培养箱:281oCo6.1.3显微镜:10-100o6.1.4电子天平:感量41go6.1.5无菌锥形
2、瓶:容量500m1、250m106.1.6无菌广口瓶:500m1o6.1.7无菌吸管:1m1(0.01m1刻度)、10m1(具0.1m1刻度)。6.1.8无菌平皿:直径90mmo6.1.9无菌试管:10mmX75mm。6. 1.10无菌灭菌桶。6.2培养基和试剂6. 2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基:见附录A中A.2。7. 2.2孟加拉红培养基:见附录A中A.3。8. 3操作步骤9. 3.1样品的稀释10. 3.1.1固体和半固体样品:称取25g样品至盛有225m1灭菌蒸储水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液。或放入盛有225m1无菌蒸储水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1:
3、10的样品匀液。11. 3.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25m1样品至盛有225In1无菌蒸饰水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。12. 3.1.3取1m11:10稀释液注入含有9m1无菌水的试管中,另换一支1m1无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。13. 3.1.4按6.3.13操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1m1无菌吸管。14. 3.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1m1样品匀液于2个无菌平皿内。同时分
4、别取1In1样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。15. 3.1.6及时将15m120m1冷却至46C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46C1C恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。6.3.2培养待琼脂凝固后,将平板倒置,28C1C培养5d,观察并记录。6.3.3菌落计数肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(co1onyformingunits,CFU)表示。选取菌落数在10CFU150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。6.4结果与报告
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