Gallios流式细胞仪操作规程.docx
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1、高端流式细胞仪Ga11ios操作规程BeckmanCou1ter医学院中心实验室2023年12月Ga11ios操作规程注意:重新开机前先确认是否已经关机30分钟以上,以保护激光器。一、开机前检查1 .检查鞘液桶并确认:外置鞘液桶是否充足,需充满1/3以上鞘液,鞘液为加有万分之一NaN2的超纯水。旋紧外置和内置鞘液桶盖子,管路与桶盖连接,无扭曲。2 .检察废液桶并确认:及时清空废液桶,可酌情在废液桶内加入少量次氯酸钠原液,旋紧废液桶盖子,管路与桶盖连接,无扭曲。3 .检查清洗液桶,确认加满清洗液。二、开机1 .开启液流车电源箱开关,启动计算机。2 .在出现的WindoW窗口对话框中输入用户名(a
2、dminstra1or)和密码(password)3 .点击桌面,此时405nm、488nm、635nm激光器自动开启,如实验需要56Inm激光器,可在仪器后方打开该激光器的电源。点击函依SOftware(工作站)图标,在用户登录对话框中,选择登陆的用户名SerViCeI,输入密码SerViCe5(密码会定期更换),点击“Next”。4 .下一窗口,点击“Connect”,启动流式细胞仪。注意:如流式细胞仪重新启动后,再次关机必须等待30分钟以上,以保护激光器。5 .打开电源箱门,做如下检查:AIRFI1TER,VACUUM1TER必需干燥无水;WATERTRAP液体不能超过1/3;VACUU
3、MTRAP液体不能超过1/4;检查SYSTEMVACUUM表,确认在-17-30in.Hg;检查SYSTEMPRESURE表,确认在2832PSI之间。注意:如SYSTEMPRESURE表计数不在上述范围内,拉出PRESUREADJUSTER钮,调节压力至302,将按钮复位。(第5条一般由仪器管理员每天检查)6 .激光预热1(M5分钟,观察流式细胞仪主机前的指示面板,“STATUS”指示灯变为绿色如图标示,且软件提示“AwaitingSamp1e,执行Prime叵,排除管路气泡后,既可以开始检测标本。三、检测标本以人双色淋巴细胞亚群为例,介绍Ga11ios流式细胞仪检测双色样本流程。1 .实验
4、试剂:单克隆荧光抗体:ISotyPeCOnt(IgG1-FITCZIgG1-PE);CD3-FITC/CD19-PE;CD3-FITCCD4-PE;SCD3-FITC/CD8-PE;CD3-FITC/CD16+56-PEo红细胞裂解液:即用型,室温保存(18-25C);0.0IMPBS;Immunotro1质控血或者EDTA抗凝血。2 .样本制备:A取5支流式试管,编号为1、2、3、4、5,分别将IOO1抗凝全血或ImmUno1质控血加入1-5号试管中,小心不要将血挂在试管内壁上;B在各管中依次加入20的IgGI-FITC/IgGI-PE、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITCCD
5、4-PECD3-FITCCD8-PE.CD3-FITC/CD16+56-PE,涡旋混匀后,室温避光孵育20分钟;C取出试管,每管加入500U1红细胞裂解液OP1i1ySeC,涡旋混匀,室温避光10分钟;300g(约120OrPm)离心5min,弃去上清液;D每管加入2m1的PBS,涡旋混匀,30Og离心5min,弃去上清液;E每管加入0.5m1PBS混匀,4C避光Ih内上机检测;若不能及时上机,加入05m1含1-2%多聚甲醛的PBS溶液,置于4冰箱保存,24h内上机检测。3 .建立双色方案:A选择“Fi1e”“NewNewProtoco1,B选择参数:点击工具栏中的Cytome1erContr
6、o1|键,选择Acq.Seiup”选项卡,点击“Parameters”进入参数选择对话框,依实验选择所需的参数,点击“OK”,为方案选择保存路径,命名为“2C1ymISOtyPe.pro”本实验所选参数为FSINT1IN;SS-INT-1in5F11-INT-1og;F11-INT-1ogeC建立该实验方案所需图形:本实验需要二个图(请同学们思考:不同的实验目的需要几幅数据显示图,怎样组合双参数散点图)键,X轴选择“SSINT1IN:SSINTSS/FS双参数点图:单击工具栏中的(Cok)rDoiPIoD1IN”,Y轴参数选择44FSINT1IN:FSINT1INw,Ga1e参数选择44Ung
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