SARS-CoV-2 感染在人类中产生组织局部免疫记忆.docx

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1、SARS-CoV-2感染在人类中产生组织局部免疫记忆抽象的对SARS-CoV-2感染的适应性免疫反应已在血液中得到广泛表征；然而，保护性免疫的大部分功能必须在组织中完成。在这里，我们通过对SARS-CoV-2血清阳性器官捐赠者(10至74岁)的检查报告，CD4+T、CD8+感染后产生的T细胞和B细胞记忆存在于骨髓、脾脏、肺和多个淋巴结(LN)中，持续时间长达6个月。肺和肺相关LN是SARS-CoV-2特异性记忆T和B细胞最普遍的部位，所有部位的循环和组织驻留记忆T和B细胞之间存在显着相关性。我们进一步在感染后长达6个月的肺相关LN中发现了SARS-CoV-2特异性生发中心。SARS-CoV-2

2、特异性滤泡辅助T细胞在肺相关LN和肺中也很丰富。总之，这些结果表明针对SARS-CoV-2的细胞和体液免疫记忆的局部组织协调可以针对未来的感染挑战进行位点特异性保护。介绍结束由新型冠状病毒SARS-CoV-2(严重急性呼吸综合征冠状病毒2)引起的全球冠状病毒病2019(C0VID-19)大流行取决于免疫记忆的建立。SARS-CoV-2感染呼吸道并诱导适应性免疫反应，导致病毒特异性T和B淋巴细胞介导感染部位的病毒清除，并通过T细胞效应功能和抗体抑制病毒传播。现在有充分的证据表明，轻度和重度感染会产生循环病毒特异性T细胞和可在外周血中检测到的抗体长达一年或更长时间/1-82。此外，病毒刺突G)蛋白

3、特异性中和抗体的存在与对SARS-CoV-2疫苗的保护相关。9、10)。然而，具有免疫逃避潜力的病毒变体的出现15)以及人群中疫苗接种率的变异性使得SARS-CoV-2持续传播。需要了解病毒特异性T和B细胞记忆的广度和功能潜力，以制定改进的策略以防止不断演变的毒株。研究人类免疫反应的一个主要限制是采样主要局限于外周血，而适应性免疫反应会在一系列组织中产生并发挥其保护功能。记忆细胞也存在于不同的组织中一一包括感染部位和淋巴器官综述于(16,17)o病毒特异性记忆CD4+和CD8+T细胞包括不同部位的循环亚群和非循环组织驻留记忆(T.)细胞的异质亚群(18,19)o在小鼠模型中，肺中的T则细胞介导

4、对呼吸道感染的最佳保护反应。20-2)，这种局部保护还涉及肺相关淋巴结(LN)的反应(23,24)o在人类中，成人中的大多数T细胞是记忆细胞。人类T细胞记忆的子集组成特定于组织部位；在黏膜、外分泌和屏障部位，TRM细胞占优势，而淋巴部位包含循环效应器和中枢记忆（TEM和TCM）以及T网型群（19、25、26）J组织中所有类型的记忆T细胞都表达与外周血中记忆T细胞不同的基因表达特征。纱，表明与循环相比，它们的维持方式不同。在SARS-CoV-2感染，尽管SARS-CoV-2特异性记忆T细胞在组织中的分布和功能能力仍然存在，但在重症C0VID-19的气道中发现了活化的TEM和Trm（您,29）无特

5、征的。感染后记忆B细胞的产生发生在次级淋巴器官（LN和脾脏）中，需要病毒特异性滤泡辅助T（TFH）细胞来促进生发中心（GC）中的B细胞分化、存活和体细胞超突变（30）o记忆B细胞可以在多个部位持续存在并表现出组织驻留表型（）。在小鼠呼吸道感染模型中，肺和肺相关LN中的常驻记忆B（Brm）细胞可能对保护很重要（鲤）o在人类淋巴和黏膜部位，记忆B细胞是主要的亚群，而幼稚B细胞在循环中占优势（型）。SARS-CoV-2感染引起S-、受体结合域（RBD）-和核衣壳（N）特异性记忆B细胞的产生，可在外周血中检测到（1,3,7）；然而，尚未报道自然感染后组织中SARS-CoV-2特异性记忆B细胞和GCB细

6、胞的分布和维持。此外，人类组织中的B细胞和T细胞记忆之间的关系在很大程度上尚未得到探索。使用来自器官捐献者的生理健康组织使得能够跨多个部位研究人类免疫细胞（义，义，35）o研究对SARS-CoV-2的组织免疫力特别具有挑战性，因为需要以前感染但未接种疫苗的供体。在这里，我们对先前感染的血清反应阳性器官供体的淋巴和粘膜部位的SARS-CoV-2特异性记忆T和B细胞群进行了调查，我们在骨髓（BM）、脾脏、肺和LN中发现了这些细胞群。感染后长达6个月o肺和肺相关LN是SARS-CoV-2特异性记忆T细胞和B细胞最普遍的部位，其中一部分表现出组织驻留特征。我们还在肺相关LN中检测到病毒特异性GCB细胞

7、以及TFH,表明体液免疫的持续产生。总之，我们的研究结果揭示了细胞和体液记忆免疫反应对位点特异性保护性免疫的局部协调。结果用于分析组织中SARS-CoV-2特异性免疫反应的器官捐赠者队列通过与器官采购组织（0P0）的合作，我们建立了一个人体组织资源，用于从器官捐赠者那里获得多个组织（16,34,35）o使用器官供体组织可以快速分离活免疫细胞进行功能分析，从而能够评估个体多个部位的免疫反应。我们确定了四名年龄在10至74岁之间且曾感染过SARS-CoV-2的器官捐献者（图染）死于非感染性相关原因，并且在器官获取时呈SARS-CoV-2聚合酶链反应（PCR）阴性。既往SARS-CoV-2感染史基于

8、采购后N蛋白抗体检测（见材料和方法）和/或2至6个月前确诊的C0VID-19病史（表S1）。对照组是在2019年11月之前采购的大流行前血清反应阴性器官捐献者，他们也死于非感染性原因（表S1）。Btlndslya/o11111二山)。6一Ogayauo11111(l山)06 - p 访 deooapnND492 D495 SARS-CoV-2:HDLJ13 SerOpOS,ve SeronegativeCD4AIM* (CD40C4-1BB; 0X404-1 BB： CD40C 0X40) - D498CD8AlM(41BBCD25) - D4954-1BB4-1BBDMSOMP SLLN20

9、.023CD25X4BloodBM Spleen Lung LLN GLN Blood BM Spleen Lung LLN GLNMP_SMPCD4 RCombinedMPSMPCD8 AMPCD8 BBloodBM Spleen Lung LLN GLN Blood BM Spleen Lung LLN GLNBloodBM Spleen Lung LLN GLN图lo先前感染的器官捐献者的血液和组织中的SARS-CoV-2特异性CD4+和CD8+T细胞。(A)SARS-CoV-2血清阳性供体和本研究使用的每个供体的组织。(B)血清阳性和血清阴性供体的抗SARS-CoV-2抗体反应性。图表

10、显示了SARS-CoV-2Spike、RBD和核衣壳特异性IgG的ETo(C)SARS-CoV-2SpikePSV中和滴度用于血清阳性和血清阴性供体O使用Mann-WhitneyU检验进行血清学统计分析。P0.05；P0.01；*PSO.OOi；*P4-1BB和/或CD40配体（CD40L）中的两个或多个共表达来鉴定的（图坨和图1）oS2A）,而病毒反应性CD8+T细胞是基于CD25和4-1BB的共表达来鉴定的（图1E和图。S2B）oSARS-CoV-2特异性CD4+和CD8+T细胞反应的量化基于二甲基亚碉（DMS0）背景减去AIM+CD4和CD8+T细胞的频率（图1,F和H）o对于CD4+T细胞，相对于大流行前对照样品，在所有检查部位（血液、BM、脾脏、肺、肺相关LN和肠道相关LN）中都发现了对S蛋白的显着反应（图1F,左）。对于非SSARS-CoV-2表位,BM、肺相关LN和肠道相关LN中有显着的CD4-细胞频率（