PCR项目及临床意义教案.docx

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1、PCR检验室常规工程简介序号种类检测工程定量/定性简称取样1RNA艾滋病毒定量HIV血清、抗凝全血2DNA乙肝病毒定量/定性HBV血清、抗凝全血3RNA丙肝病毒定量/定性HCV血清、抗凝全血4DNA结核杆菌定性TB痰液、胸腹水5DNA人乳头瘤病毒定性/分型HPV分泌物拭子、病损组织6DNA淋球菌定性NG分泌物拭子（宫颈管、尿道壶腹部）7DNA沙眼衣原体定性CT分泌物拭子（宫颈管、尿道壶腹部）8DNA解版版原体定性UU分泌物拭子（宫颈管、尿道壶腹部）9RNA甲型流感病毒定性咽部拭子、肺灌洗液10RNA乙型流感病毒定性咽部拭子、肺灌洗液11DNA肺炎支原体定性MP咽部拭子、肺灌洗液12DNA单纯疱

2、疹病毒定性HSV分泌物拭子、皮损组织13DNA巨细胞病毒定量/定性CMV血清、血浆或尿液14DNA梅毒螺旋体定性TP皮损刮出液、抗凝全血15DNAEB病毒定性EB分泌物拭子、组织等16DNA幽门螺旋杆菌定性HP口腔含漱液、胃粘膜17RNA肠道病毒71定性EV71大便样本等18RNA柯萨奇病毒A16定性CA16大便样本等1 .乙型HBVDNA定量HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性，通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、准确预后及新药研制等各个方面具有重大意义：1）判断疾病的严重程度和传染性。HBV-DNA是直接反映

3、HBV复制状态及传染性的最正确指标。2） PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价。采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA,结合“二对半检测结果，对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学。3）观察抗病毒药物疗效，指导药物用量。直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法。根据?2000拉米夫定临床应用指导意见?，中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNAo同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考。4）献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断。HBsAg

4、在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2-4月出现，平均为56天左右。而HBV-DNA的检出可以将该所谓窗口期提前6-15天，对于早期诊断和提高输血平安有着重要的意义。5）预测病情、判断预后。通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎。抗一HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重。6）对阻断母婴传播的监测。联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母婴传播，但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反响，荧光定量PCR可对此进展监测。7）器官移植中的作用。肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法，定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值。乙肝病毒定量相关检测还

5、有：乙肝标志物定性，乙肝标志物定量，乙型HBV-DNA定量，肝脏功能检测。2 .乙型HBV-DNA定性HBV-DNA是乙肝病毒基因，其有无、多少是乙肝病毒存在及有无复制能力的直接标志。早期诊断乙肝病毒感染的直接证据，提高乙肝病毒检测的阳性率，用于乙肝病毒治病机理的研究，作为乙肝病毒分子流行病学研究。乙肝病毒相关检测还有：乙肝标志物定性，乙肝标志物定量，乙型HBV-DNA定量，肝脏功能检测。3 .丙肝病毒RNA定量HCVRNA定量检测有助于预测、监测抗病毒治疗的效果，HCV病毒核酸的定量检测在一定程度上能反响肝脏炎症活动程度，分析抗病毒治疗后HCVRNA血清水平有助于总结抗病毒制剂的疗效，为调整

6、剂量、确定疗程提供依据。丙肝病毒相关检测还有：丙肝抗体检测，肝脏功能检测。4 .结核杆菌DNA定性根据临床表现，常规痰涂片或别离培养对某些结核病人可能造成误诊或漏诊。荧光PCR理论上可检出一个结核杆菌，特异性好，且时间短至1-2小时即可出报告。可以对结核病人早期诊断，可以鉴别诊断肺结核和肺癌。作为抗痍治疗的疗效评价；结核病的分子流行病学研究。结核杆菌的相关检测还有：结核抗体检测，ADA,结核杆菌芯片检测，抗酸染色，OT试验，PPD试验，放免分析，结核培养。5 .HPV基因分型宫颈癌是人类所有癌症中唯一病因明确的癌症，即人乳头瘤病毒的感染是宫颈癌发生的必要条件和主要病因，99.7%的宫颈癌患者都

7、能发现高危型HPV感染，从HPV感染到宫颈癌的发生需要经过多年甚至数十年的时间，这为宫颈癌筛查指明了方向。因此早期定期进展HPV感染的筛查，对预警癌变倾向，及时发现、预防和早期诊断及临床治疗具有非常重要的意义。相关检查工程：组织原位杂交，基因芯片技术，液基细胞学试验6 .乳头瘤病毒DNA定性HPV16,18病毒DNA通常整合到人基因中，可能是宫颈癌的启动癌基因，对于妇产科的防癌普查有指导意义，而HPV6.11常可诱发良性湿疣或宫颈糜烂。因此，HPV的检查非常重要。相关检查工程：组织原位杂交，基因芯片技术，液基细胞学试验。7 .梅毒螺旋体DNA定性FQ-PCR检测人体不同来源标本中TP-DNA的

8、结果，实际上是反映了梅毒螺旋体在这些部位的载量及其消长规律。梅毒血清学检查比方RPR、TPPA,是诊断各期梅毒最常用的实验室检查手段，但其阳性结果不代表体内有活的TP存在。相关检查工程：RPR、TPPA、TPHA8 .淋球菌DNA定性传统的涂片、培养等方法，灵敏度不高，女性病人检出率仅50%淋球菌感染，男性可发生尿道炎。女性可引起尿道炎及子宫颈炎。不经治疗或治疗不彻底，可致慢性感染。胎儿经产道时，可感染淋病性急性结膜炎。因此，在淋病的早期诊断,对该病有重大意义。淋球菌相关检查工程：淋球菌培养，涂片革兰氏染色，基因探针技术。9 .沙眼衣原体DNA定性非淋球菌感染的尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、急性

9、输卵管炎及盆腔炎，有超过50%是由沙眼衣原体感染所致，同时可引起不孕不育。因此，在妇产科和男性生殖泌尿科，同时检测UU和CT很有必要。可致沙眼、成人和新生儿包涵体结膜炎。沙眼衣原体相关检查工程：细胞培养，免疫荧光法，沙眼衣原体抗体检测。10 .解胭支原体DNA定性解版支原体在非淋球菌性尿道炎中，有50%是由本病引起的。如果孕妇生殖道带有解版支原体，可通过胎盘感染胎儿引起早产、死胎，分娩时可引起新生儿呼吸道感染。另外还可导致不孕不育。因此，妇产科普查解胭支原体有很重要的意义。相关检查工程：解胭支原体培养，解腺支原体抗体,生长抑制试验，代谢抑制试验。11 .EB病毒DNA定性EB病毒属于疱疹病毒，

10、可引起增殖性感染和非增殖性感染。特别是非增殖性感染，可导致细胞癌变。被认为与传染性单核细胞增多症。淋巴癌、胃咽癌、何杰金氏癌、慢性疲劳综合症有关。相关检查工程：EB病毒特异性抗体或异嗜性抗体凝集试验。12 .单纯疱疹病毒DNA定性HSV-1型：主要侵犯口、唇的皮肤黏膜，可引起脑炎，偶尔可见于外生殖系统。HSV-2型：一般与外生殖系感染和新生儿感染有关。可引起脏器的病变1包括脑炎）偶见于口腔病变。相关检查工程：单纯疱疹病毒抗体检测。13 .肺炎支原体DNA定性肺炎支原体是原发性非典型肺炎和急性呼吸道感染的病原体，尤其是儿童和青少年中常见。常在军营和中小学生中流行。每隔3-5年流行一次。许多患者病

11、症较轻，只有头疼、发热、咳嗽等呼吸道病症，也有个别引起死亡的报道。有时合并中耳炎、心血管、神经病症和皮疹。肺炎支原体感染是在治疗上与其它微生物感染是治疗不尽一样，为防止滥用抗生素，应早期、快速、准确的检测肺炎支原体。相关检查工程：肺炎支原体抗体检测；补体结合试验；肺炎支原体培养。14 .幽门螺旋杆菌DNA定性幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原。现在PCR可通过鼻胃管收集5ml胃液作PCR检测。采用胶囊包裹的尼龙线取胃液标本的方法，使这一诊断性试验的侵入性更小。相关检查工程：C13/C14呼吸法；血清学检验。15 .肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型RNA定性这两个病原体是引起手足口病的主要病原体。而手足口病多发生于5岁以下儿童，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。个别重症患儿如果病情开展快，导致死亡。