酶联免疫吸附试验检测BVDV抗体.docx

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1、酶联免疫吸附实验检测BVDV抗体SOP编号：S0P-Z1053-00页码：13版本号：01修订号：00机密等级：秘密起草人起草日期颁发部门质量管理部审核人审核日期批准人批准日期生效日期分发清单研发部质量管理部综合管理部生产管理部市场销售部财务部1. 目的建立酶联免疫吸附试验检测牛血清中牛腹泻病毒抗体的程序。2. 适用范围初制、精制血清中BVDV抗体的检验操作。3. 职责3.1. 质量管理部：负责本规程的起草。3. 2.QC：负责本程序的操作。4. 3.总经理：负责本规程的审批。5. 定义无6. 引用标准无7. 材料及设备7.1 试剂盒（北京爱德士元亨生物科技有限公司出品）6. 2实验器材7.

2、2.196孔酶标仪8. 2.2洗板机9. 2.3微量板振荡器6.2.4可调移液器（200D10. 流程图无11. 内容8.1试验之前所有试剂盒组份都必须恢复至1826。8.2操作过程8.2.1取出已包被好的微量反应板，并在记录纸上标记每个样品的位置。8.2.2.在每个反应孔中加入1001抗体稀释液，可以用多道移液器。8.2.3,在阴性对照的双孔各加入251的阴性对照。8.2.4.在阳性对照的双孔中各加入251的阳性对照。8.2.5.在剩下的反应孔中分别加入251被检样品，不同的检测样品要更换吸头。8.2.6.轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。8.2.7在1825C的条件下孵育

3、90分钟。8.2.8.吸出反应孔中的液体，每孔中加入3001洗涤液，进行洗涤，共洗5次，每次洗涤后将液体吸干。最后一次洗涤完毕，将反应板在吸水性材料上用力拍干。8.2.9.每个反应孔中加入1001酶标抗体。8.2.10在1826C孵育30分钟8.2.11重复&2.8.步骤8.2.12在每个反应孔中加入IOO1TMB底物溶液。1. 2.13在1826C条件下于黑暗处孵育10分钟（1分钟）。在加完第一个孔开始计时。8. 2.14在每个反应孔中加入1001终止液，终止反应。加终止液时要按照加入底物溶液的顺序进行滴加。9. 2.15将酶标仪在空气中调零。10. 2.16于45Onm单波长测定样本以及对

4、照的吸光值。11. 2.17结果（1） 结果判定：阳性对照平均值（PCX）与阴性对照平均值（NCX）之差必须大于或等于0.15,阴性对照平均值必须小于或等于0.25,实验结果有效。（2） 化气标准样品平均值（SJ）-NCZ/PCj-NCXV0.2的被检样品，判为阴性。SX-NC/PCX-NC/0.2,但V小于0.3的被检样品，被判为可疑。SX-NC(/PCX-NCX2大于O.3的被检样品，判为BVDV抗体阳性。12. 注意事项91在孵育过程中将微量反应板封闭或在湿盒中孵育，以防反应孔中的液体蒸发。92*在洗涤时以及在加入下一步试剂前要防止反应板出现干燥现象13. 附录及派生记录101酶标法检测BVDV抗体记录F-S0P-Z1053-0014. 相关文件14.1. 质量检验超出标准调查分析程序X15. 修订记录修订号修改内容生效日期