HIV抗体检测标准操作程序(SOP).docx

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1、HIV抗体检测标准操作程序(SOP)微生物科样本的采集和处理二、检测方法和步骤三、质控品的应用方法四、仪器的使用和维护五、结果的记录、解释与报告六、保密程序七、实验室的清理、消毒八、艾滋病检测实验室安全防护九、附表样品的采集和处理1样品的采集：11血清样品采集：用注射器抽出一定量静脉血，室温下自然放置1-2小时,待血清凝固和血块收缩后在用3000rmp离心15min,吸出血清备用。1.2 抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。1.3 采样注意事项：131采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。1.3.2

2、采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。2、样品的保存：1.1 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20摄食度以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8摄食度。3 .样品的运送：3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。3.2 将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。3.3 特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛有样品的试管包扎好，保证不会破碎和遗

3、漏。4 .样品的接收：4.1 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。4.2 核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。检验方法和步骤1检验方法：酶联免疫吸附试验（E11SA）2 .检验步骤：严格按照试剂说明书操作。3 .注意事项：3.1 禁止肉眼判读！3.2 保证酶标仪，洗板机正常运转，保证加样器准确，选择高质量的与加样器配套的T1P头3.3 使用有效期内的试剂3.4 保证样品质量质控品的应用方法1 .质控品按临床样本对待，操作应依照实验室安全管

4、理条例执行。2 .质控品使用前应在室温（1825C）平衡30分钟，且使用前应混匀。3 .外部对照的设立：日常检测中，每次试验均应设立一孔外部对照（一次试验中使用多块酶标板时，每块酶标板均应单独设立一孔外部对照）。4 .质控品开盖使用后，可保存于28,稳定2周。5 .质控品应避免反复冻融。仪器的使用和维护1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件：1.1酶标读数仪、洗板机每天：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。每月：检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。每年：检查、清洗滤光片，如果

5、出现破裂或霉点则要更换。根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校验并保留记录。12移液器：一年至少应该标定一次，发现异常情况应随时进行标定。标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校准法、同位素计数法以及使用配套校准盒等。标定多道移液器时，必须保证每一个加样头都能够连续、准确地加样。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。范例用蒸僧水称量法标定移液器：在室温为22C的无风的工作室中，在万分之一级别天平上放置一个小三角烧瓶，用待标定的移液器吸取存放过夜的蒸储水加入烧瓶底部，称重并计算蒸储水重量，连续称重10次。加蒸镭水的量根据待标定移液器的规格而不同（见下表），10次标定称量均

6、在要求的重量范围内为合格，贴上合格标签，注明标定日期，不合格移液器要请生产厂家进行校准。填写和保存较准记录。称重法标定移液器方案移液器规格蒸储水量要求重量范围0.5-1012U11.75-2.25mg5-4011019.8-10.2mg40-200U170169.4-70.6mg200-10001300U1298.0-302.0mg1-5m1200011990.0-2010.0mg2-10m1350013485.0-3515.0mg3、冰箱和孵育箱：定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录低温及超低温冰箱的温度。4、定期检查其他仪器设备。结果的记录、解释与报告1HIV抗体筛查1.1筛查试验呈

7、阴性反应出具HIV抗体阴性报告。12筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）,不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理：12.1填写HIV抗体复查送检单（附表2）,经一名检测操作人员和一名具有中级以上技术职称的人员审核签字。1.2.2尽可能重新采集受检者的血样。12.3将二份血样（或仅原血样）连同HIV抗体复查送检单一并送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或直接送确认实验室确认。1.2.4筛查中心实验室应尽快用两种试剂进行复测，如结果均阳性或一阴一阳，则应将送检标本和HIV抗体复查送检单一并送艾滋病确认实验室确认。如复检结果均为阴性，在送检单上盖上“HIV抗体

8、阴性（一）字样图章，并及时将结果反馈送检单位，不必再送确认实验室。12.5做好检测后咨询。保密程序1 .要有专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁；严格遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。2 .检测的阳性结果不是最终结果，应及时做进一步确认,初筛实验室不能出具H1V抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。实验室的清理和消毒1带入和带出实验室的物品1.1对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或其他适当的装置内打开。1.2将HIV测试样品转送其他实验室时，应防止对人员和环境的污染。护送样品的人应明确接收地点和接

9、收人，实验室负责人或其指定的人员应及时确认样品已送达指定的实验室，被转入安全位置并得到妥善处理。1.3污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。14用于国际空运的样品要按照国际空运协会(IATA)的规则进行包装和标记，并提交相应的资料。2 .减少利器的使用2.1 尽量避免在实验室使用针头、刀片等利器，.如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。2.2 最好不使用玻璃制品。2.3 尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等,以降低直接接触血液和刺伤的危险性。应将用过的针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。3 .实验室常用物品的消毒方法：1.

10、1 1废弃物缸：10%(vv)次氯酸钠(含10,000PPn1有效氯)。1.2 生物安全柜工作台面和仪器表面：70%乙醇。1.3 溢出物:10%次氯酸钠(wv)o3.4生物安全柜和实验室：甲醛蒸气熏蒸。生物安全柜：25m1福尔马林(40%甲醛，wv)和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6小时，最好过夜。实验室：福尔马林和水加热沸腾，其体积根据实验室的大小而定。3.5污染的台面和器具：40%甲醛水溶液，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。艾滋病检测实验室安全防护1 .建立安全制度1.1 实验室的设备、建筑和设施的安全性应通过专家的评审。12建立安全标准操作程序，该程序应适

11、用于现有的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。13无论是否发生意外事故，每年都要对安全标准操作程序及其实施情况进行检查。1 .4制定意外事故处理预案。.建立意外事故的登记和报告制度。15实验室主任要按照艾滋病职业暴露安全药物贮备库和贮备点的实施方案（试行）（见附录1）的规定，对突发事件和职业暴露事故进行调查、处理和报告。2 .人员管理2.1 实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做安全检查。2.2 新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。2 .3严格

12、执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。3 .培训3.1 所有工作人员必须经过HIV检测技术和实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。3 .2必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。4 .个人保健4.1 高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。4.2 进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。4.3 进入实验室应穿隔离衣，戴

13、手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。4. 4离开实验室前必须脱去隔离衣并洗手。5. 5严禁在艾滋病检测实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。5.实验室事故处理5.1 皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其他消毒剂消毒伤口。5.2 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其他皮肤消毒剂。5.3 粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。5. 4衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。6. 5污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主

14、管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。7. 事故登记（附表5）：7.1 事故发生的时间、地点及详细经过。7.2 暴露方式；受伤部位、伤口深浅、暴露程度；污染物种类（培养液、血液或其他体液）以及其中含有H1V的情况。6. 3处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。7. 4是否采用暴露后药物预防，如果是，应详细记录用药情况、包括首次用药时间、服药方案和毒副作用。8. 5随访检测的日期、项目和结果。9. 报告和检测9.1、 发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV抗体，暴露一年内要定期检测。7.2、发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家，检测同前。8HIV职业暴露后的药物预防，参见附表6。