云岭牛第4部分：胚胎移植.docx

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1、ICS 65.020.30CCS B43H53云 南 省 地 方 标 准DB53/T 447.42022DB53/T 447.4-2012云岭牛第4部分：胚胎移植2022 - XX - XX 发布2022 - XX - XX 实施云南省市场监督管理局发布DB53/T 447. 42022本文件按照GB/T 1. 1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件为DB53/T 4472022云岭牛的第4部分。DB53/T 447己经发布了以下部分：第1部分：品种； 第2部分：养殖场建设规范； 第3部分：人工授精； 一第4部分：胚胎移植； 一第5部分：体外胚胎生产；

2、 第6部分：饲养管理； 第7部分：饲草加工与调制技术； 第8部分：育肥技术； 一第9部分：疫病防治； 一第10部分：档案管理； 第H部分：胴体生产、评定及分割技术。本文件代替DB53/T 447. 4-2012BMY牛 第4部分：胚胎移植技术规范，与DB53/T 447. 4-2012相比，除结构调整和编辑性改动以外，主要技术变化如下：a）更改标准名称为“云岭牛；b）更改全文“BMY牛”为“云岭牛”；c）“术语”中增加了英文名称，更改了 3. 5表述（见第3章）；d）更改了 “胚胎移植的基本原则”中部分表述（见4.2）；e）更改了 “供体牛饲养管理”中部分表述（见5.2.3）；f）更改了 “超

3、排方法”中部分表述（见6.1. 2.1、6. 1.2.3）；g）更改了 “冲胚液的配制”中部分表述（见7.2.3）；h）更改了 “冲胚步骤”中部分表述（见7.2.4.4）；D更改了 “检胚”表述顺序（见8. 1）；J）更改了 “胚胎的质量鉴定”中部分表述（见8.2.1.1、8.2. 1.2, 8.2. 1.3）；k）更改了 “胚胎解冻”中部分表述，并将细管装枪及移植部分内容并入10.5.4 （见9.2、10. 5.4.10. 5. 4.2） o本文件由云南省草地动物科学研究院提出。本文件由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。本文件起草单位：云南省草地动物科学研究院。本文件主要起草人

4、：黄必志、和占星、王安奎、金显栋、张继才、刘建勇、王黄梅芬、亏开兴、杨世平、赵刚、袁希平、杨凯、李乔仙、杨寿军。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：一一2012年首次发布；一一本次为第一次修订。DB53/T 447-2022云岭牛是以2014年12月国家审定新品种“云岭牛”为载体制定的综合养殖标准，旨在从品种、养殖场建设、繁殖、管理、饲草加工调制、育肥、疫病、档案和胴体评定分割等方面指导和规范云岭牛的养殖，带动云岭牛规范化、标准化、产业化发展的同时，可提高养殖场（户）养殖水平和养殖效益，促进云南肉牛产业高质量发展。DB53/T 447-2022由H-一个部分构成。 第1部分：品种。目的在

5、于确立云岭牛特征和特性、生产性能、种牛等级和良种登记，适用于云岭牛品种鉴定和种牛等级评定。一一第2部分：养殖场建设规范。目的在于确立云岭牛选址、规划与布局、牛舍建设和辅助设施建设等技术要求。 第3部分：人工授精。目的在于确立云岭牛种公牛选择、母牛的初配年龄与发情鉴定、输精方法、母牛妊娠诊断等技术要求。一一第4部分：胚胎移植。目的在于确立云岭牛快速扩繁受体牛同期发情、供体牛超数排卵与输精、胚胎回收、胚胎质量鉴定、胚胎冷冻保存与解冻、胚胎移植、受体牛妊娠诊断等技术要求。 第5部分：体外胚胎生产。目的在于确立云岭牛供体牛的选择与饲养管理、卵母细胞的获取、卵母细胞的检出与分级、卵母细胞的IVM、卵母细

6、胞的IVF、受精卵的IVC等技术要求。一一第6部分：饲养管理。目的在于确立云岭牛饲养管理的基本要求以及牛场卫生、各类牛的饲养管理等技术要求。 第7部分：饲草加工与调制技术。目的在于确立云岭牛养殖过程中青贮饲料、秸秆氨（碱）化饲料、青干草饲料的加工调制技术要求。 第8部分：育肥技术。目的在于确立云岭牛优质牛肉生产和雪花牛肉生产技术要求。一一第9部分：疫病防治。目的在于确立云岭牛的生物安全、牛场消毒、疫病防治及无害化处理等技术要求。 第10部分：档案管理。目的在于确立云岭牛养殖过程中建档范围、内容及档案管理的技术要求。 第11部分：胴体生产、评定及分割技术。目的在于确立云岭牛胴体生产、评定、分割以

7、及分割肉包装等技术要求。DB53/T 447-2022包含的十一部分内容均是符合生产实际需要，涵盖了生产环节中的品种、养殖场建设、繁殖、饲养管理、饲草加工调制、育肥、疫病防治、档案管理和胴体生产、评定及分割多方面技术。该标准可规范云岭牛从养殖场到牛肉产品的全系列生产技术，充分发挥云岭牛生产性能，提高养殖水平，促进规模化标准化养殖的构建和肉牛产业的发展。#DB53/T 447. 42022云岭牛第4部分：胚胎移植1范围本文件规定了胚胎移植的要求、供体牛的选择与饲养管理、供体牛的超排及输精、胚胎回收、胚胎质量鉴定、胚胎的冷冻保存与解冻、胚胎移植、受体牛的妊娠诊断等技术要求。本文件适用于云岭牛的超数

8、排卵及胚胎移植（MOET）的各个环节。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4143牛冷冻精液DB53/T 247. 3肉牛养殖综合标准第3部分：繁殖技术DB53/T 447. 3云岭牛第3部分：人工授精3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。1.1 1供体牛 donor提供卵子和胚胎的优秀繁殖母牛。1.2 2受体牛 recipient接受胚胎（移植）的母牛。1.3同期发情 synchronous estrus使用外源激素来调控

9、一群母牛的发情进程，使之在预定的时间内集中发情和排卵。1.4超数排卵（简称超排）superovulation在母牛发情周期的适当时间，使用外源性腺激素，诱导更多的卵泡正常发育，并多排卵。1.5胚胎冷冻保存 embryo cryopreservation按胚胎冷冻的原理和方法，对胚胎进行冷冻，并在液氮中长期保存。1.6胚胎移植 embryo transfer将受精卵（胚胎）移植到受体母牛子宫角内。4胚胎移植的要求DB53/T 447. 42022供体牛和受体牛应为同一属种，供体牛和受体牛的发情时间相差不应超过24 h,且从供体牛输卵管内收集到的胚胎应移植到受体牛的输卵管内，从供体牛子宫角内收集到

10、的胚胎应移植到受体牛的子宫角内。5供体牛的选择与饲养管理5.1 供体牛的选择符合云岭牛的典型特征，系谱清楚，遗传性能稳定，种用价值高，健康、体质健壮、膘情中等。性周期正常，生殖机能好。年龄14月龄到10岁，体重280 kg600 kg。经产母牛产后60天以上，生殖机能恢复正常。5.2 供体牛的饲养管理保持环境卫生、避免各种应激、分群饲养、专人管理、加强蛋白营养、注重补充青绿饲料、优质青干草、维生素和微量元素，保持营养平衡。6供体牛的超排及输精1.1 超排处理1. 1.1超排激素FSH （促卵泡素）、PG （前列腺素及其类似物）、CIDR或CUE-MATETM （孕酮阴道栓）、GnRH（促性腺激

11、素释放激素）、LH （促黄体生成素）等。6. 1.2超排方法7. 1.2.1 FSH + PG 法在发情周期的任一天对供体牛用一次PG法进行同期发情处理或选择自然发情的供体牛在发情周期的第10天11天开始采用递减法每天早、晚各注射一次FSH,连续注射4天，在注射FSH的第3天注射PG。8. 1.2.2 CIDR或 CUE-MATE + FSH + PG 法以供体牛发情当日为0天，在第（61）天置入CIDR或CUE-MATETM,第10天11天开始注射FSH,连续注射4天，第12天13天（FSH注射第3天）注射PG,同时取出CIDR或CUE-MATETM。9. 1.2.3 FSH 和 PG 用量

12、6.1.2.1和6.1.2.2中FSH和PG用量可采用下列任意一种组合：日本产FSH 24 mg36 mg +美国产PG 30 mg35 mg或国产氯前列烯醇0. 6 nig0. 8 mg；加拿大产FSH 320 mg380 mg +美国产PG 30 mg35 mg或国产氯前列烯醇0. 6 mg0. 8 mg；国产FSH 10 mg12 mg +国产氯前列烯醇0.6 mg0. 8 mg01.2 发情鉴定在注射PG 24 h后进行发情鉴定，发情鉴定方法按DB53/T 247. 3的规定执行。1.3 冻精质量检查应符合GB 4143的规定。1.4 输精注射PG后48 h采用直肠把握输精法进行第一次

13、输精，间隔12 h进行第二次输精，输精方法按DB53/T447. 3的规定执行。在第一次输精时注射GnRH或其类似物50pglOOpg或在第一次输精时注射LH2000IU3000 IUo7胚胎回收（冲胚）7. 1冲胚时间供体牛以超排发情后第一次输精当日为0天，在第（7 0.5）天，用非手术法回收胚胎。7.2冲胚前的准备7. 2.1主要器材冲胚管及内芯、子宫颈扩张棒、子宫颈黏液吸除器、过滤式集卵（胚）杯、Y字型三通硅胶管，以及50 mL注射器、20血注射器、10 mL注射器、5 mL注射器、培养皿、量筒、毛剪、镜子等。8. 2.2药剂新洁尔灭、2%利多卡因、0.9%生理盐水、酒精、青霉素、链霉素

14、等。9. 2.3冲胚液的配制基液：杜氏磷酸缓冲液（PBS）,配方见附录A。也可用进口 PBS粉配制。冲胚液：含MFCS （胎犊血清）或CS （犊牛血清）加含抗生素的PBS液。也可直接用进口的冲胚液。10. 2.4冲胚准备按以下步骤进行冲胚准备：a）将供体牛在保定架内站立保定好,用2%利多卡因或普鲁卡因3矶5 mL进行硬膜外腔麻醉：b）将牛尾固定，清除直肠中的粪便；c）母牛阴部先用清水清洗，再用新洁尔灭溶液清洗，然后用灭菌卫生纸擦干，最后用酒精棉球消毒d）用子宫颈扩张棒扩张子宫颈口，再用黏液吸除器清除子宫颈黏液；e）检查冲胚管气囊是否完好，内芯用冲胚液湿润后插入冲胚管并固定好；f）将冲胚管缓慢插

15、入到子宫角前端；g）用吸满20 mL空气的注射器向气囊内注入空气，青年牛10 mL15 mL,经产牛15 mL18 mL；h）确定气囊是否在子宫角内理想的位置，固定冲胚管；i）抽出内芯，连接冲胚管与Y字型三通管；11. .5冲胚按以下步骤冲胚：a）关闭三通管输出管开关，用50 mL注射器或自动灌流仪每次吸取15 mL30 mL冲胚液从输入管注入子宫角；b）关闭输入管开关，用直肠中的手将子宫角上扬并进行适度按摩，打开输出管开关，使回收液从输出管流到集收杯中；c）每侧子宫角冲洗6次10次，每侧子宫角用250曲,300 mL冲胚液，根据供体牛子宫角的大小，先少后多，逐渐增量；d） 一侧子宫冲胚完毕后，用注射器筒接到冲胚管的注气口将气囊中的气体放出，抽出冲胚管;e）用同样的方法对另一侧子宫