血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定作业指导书.docx
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1、血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定作业指导书1 .实验原理VitrOSAST试剂是一种干燥,多涂层的,在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。将一滴患者样品滴于干片上,样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。在磷酸毗哆醛的催化作用下,谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向a-酮戊二酸转移生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸在草酰乙酸脱羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。随后丙酮酸被丙酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。最后是过氧化氢与白色染剂在过氧化物酶的催化下生成一种有色染剂。在37C用反射仪可以测定白色染剂的氧化率,然后再将某一线性范围内反射强度变化率转化为以U/1为单位的酶活性度。干片支撑层
2、上的短波滤光剂可以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。测定方式:速率法波长:670nm测试时间和温度:37约5分钟反应过程:AST,磷酸毗哆醛天门冬氨酸+a-酮戊二酸*草酰乙酸+谷氨酸草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸丙酮酸+二氧化碳丙酮酸氧化陋丙酮酸+磷酸盐+02过氧化氢+乙酰磷酸酶过氧化物酶过氧化氢+白色染剂有色染剂2 .标本:2. 1病人准备:无特殊。2.2样品类型:血清;肝素锂/钠抗凝血浆。2.3标本采集与处理:样品采集后3天内以IOOOg最少离心10分钟,然后吸出血清。特别要注意:样品不能含细胞物质,因为血小板中AST活性也很高,既使离心不足10分钟的新鲜血浆与新鲜血清的测试结果相比都有很大差
3、异。处理样品时要将其当成生物污染品。3.标本的存放:血清、血浆室温下最多3天;48C冷藏最多1周;样品冷冻保存可达3个月。4 .标本的运输:样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5 .标本拒收的标准:由于用草酸钾/氨化钠,枸掾酸和EDTA抗凝的标本结果负偏差50%,因此不能使用。此外,因为红细胞中AST活性很高,溶血标本也不能使用。6 .试验材料:6.1测试AST所需的物品包括:VitroS化学定标物Kit3;Vitros特制质控液;VitroS7%BSA稀释液。XX厂家提供原装进口,试剂盒外包装上标明了测试项目名称,试剂标签代码,有效期限和储藏温度。6.1.1试剂组成:干片成分:反应成份是天
4、门冬氨酸钠;一酮戊二酸钠;磷酸毗哆醛钠;磷酸钠;2-(3,5一二氧甲基一4一羟苯)一4,5一二(4一甲氨基)咪哇(白色染料);M化丙酮酸;过氧化物酶以及草酰乙酸脱羟酶。其它成份有酶辅助因子,染色剂,粘合剂,缓冲剂,表面活性剂,稳定剂,染料溶剂,滤色剂,净化剂及聚合物交叉连接剂。干片标记:试剂盒外包装上标明了测试项目名称,试剂标签代码,有效期限和储藏温度。6.1.2试剂准备:从冰箱中取出干片盒,在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟,而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪器
5、的储藏器中。说明:在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6.1.3试剂稳定性与贮存未开封的干片盒:存储在-18或低于该范围。说明:为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时,未开封的试剂盒在28C(3646oF)下最多可以冷藏三个月。在机内干片储藏器中的干片盒:在仪器上放置时间不能超过2周,否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时,可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测:仪器关闭时间超过2小时;再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确,VitrosAST干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。6.1.
6、4变质指示:超过有效期的试剂干片不能使用。6.1.5注意事项:为避免干片盒打开以前其内包装受损,不能摔打干片盒;不要让尖利物刺入内包装。6.2校准品:用Vitros化学定标物Kit3。血清、血浆都用相同的定标液,不过各自的SAVs值不同。有关标准液的配制,使用及保存的配制,保存和稳定的详情,可参阅VITR0S250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品:使用VitroS特制的质控物品;若使用其它的一些质控物品,当与别的AST测试方法比较时就会出现差异,如:用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品;含有高浓度防腐剂,稳定剂和其它化学添加剂的质控物品;猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低,
7、还会因测试方法不同而变化;酶的活性可能会由于酶源,稀释温度和复溶活化时间的不同而发生变化;乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。有关质控液的配制,保存和稳定的详情,可参阅V1TROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器美国XX厂家V1TR0S250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。8 .操作步骤:将试剂复温后直接放入仪器,样品编程,仪器5分后自动打印结果。具体测试程序请参阅VITR0S250操作手册.S0P。具体定标程序:参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标:一一在维护和保养时更换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性范围内时,详情参阅操作手册
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