培养基的适用性检查标准操作规程.docx

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1、培养基适用性检查操作规程1目的：规范中心化验室所用培养基的适用性检查。2范围：适用于营养琼脂培养基、玫瑰红钠培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基及麦康凯琼脂培养基的适用性检查。3责任：中心化验室检验员对本程序的实施负责。4内容：4.1依据：中国药典2023版二部附录4.11检测频次：每批新购置的培养基，同时用对照培养基做对比，对照培养基来源应从权威性的国家食品药品检定研究院购进，同时做好相关记录,如样品培养基的批号、包装规格、数量及生产厂家；对照培养基的批号、包装规格等。4.111营养琼脂培养基，所用菌种：大肠埃希菌CMCC(B)、金黄色葡萄球菌CMCC(B)、枯草芽泡杆菌CMCC(B).4.

2、11.2菌液制备：取经35培养18-24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽抱杆菌的营养琼脂培养基培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成ImI含菌50T00CfU的菌悬液，做活菌计数用。取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽泡杆菌各50-IOOCfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注样品培养基，每株试验菌平行制备两个平皿，混匀，凝固，同法制备对照培养基置35C培养48小时计数，见下表出具检验结果：表I-A培养基适用性检查培养结果菌种类型样品培养基(A)对照培养基(B)AB(%)样品培养基菌与对照培养基上的菌落落形态对比皿1皿2A皿11H12B大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌检验标准：被检培养基

3、的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落应一致，则该培养基的适用性检查符合规定。4.2.1玫瑰红钠琼脂培养基，所用菌种：白色念珠菌CMCC(F)、黑曲霉菌CMCC(F).4.2.1.1菌液制备：取经25培养24小时的白色念珠菌改良马丁琼脂斜面培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成ImI含菌为50-100cfu的菌悬液，做活菌计数用。4.2.1.2接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养五天，加入5m1含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成Im1含抱子数为50-IOOcfu的抱子悬液。4.2.1.2.1培养基适用性检查4

4、.2 .12.2取白色念珠球菌、黑曲霉各50100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾玫瑰红钠样品培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固,同法制备对照培养基，置25培养72小时，计数。结果见表1A-1。表I-A-I培养基适用性检查培养结果菌种类型样品培养基对照培养基A/B(%)样品培养基菌与对照培养基上的菌落落形态对比皿1皿2皿1皿2白色念珠球菌黑曲霉检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。4.3 胆盐乳糖培养基、麦康凯琼脂培养基、MUG培养基适用性检查。4.3.1 取大肠埃希菌一支编号：于室

5、温复苏转种培养1824小时编号：,用5m10.9%无菌NaC1溶液10倍递增稀释至IOT-IO8,以上各稀释级均置冰箱4-8C保存。4.3.1.1每m1菌液含菌量的计数测定。测定方法：取稀释后的菌液Im1（剩余的菌液冷藏保存），置直径90mm的无菌平皿中，注入15-2Orn1已经过适用性检查确定的温度不超过45的溶化的营养琼脂培养基，每稀释级每种培养基至少制备2个平板，培养温度为30C35C,培养3天。表1-A-2菌种类型培养基JH11皿2平均大肠埃希菌10大肠埃希菌IO5大肠埃希菌IO6大肠埃希菌IO7检验结果：大肠埃希菌于稀释级菌数在50-IOOCFUo431.2胆盐乳糖培养基促生长能力检

6、查：分别接种不大于IOOcfu的试验菌于被检胆盐乳糖培养基和对照胆盐乳糖培养基中，在30-35培养18小时。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。4.3.1.2.1胆盐乳糖培养基抑制能力检查：分别接种金黄色葡萄球菌与被检培养基和对照培养基中，在30-35培养18-24小时被检培养基与对照培养基比较，金黄色葡萄球菌不得生长。4.3.1.3麦康凯琼脂促生长能力：取大肠埃希菌0.Im1（含菌数50-100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，30-35C培养48小时，被检麦康凯琼脂培养基上生长的菌落大小、形态特征与对照培养基应一致。麦康凯琼脂指示能力：取大肠埃希菌0.1m1（含

7、菌数50-100CfU）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，30-35培养48小时，被检麦康凯琼脂培养基上生长的菌落大小、形态特征指示剂反应情况等与对照培养基应一致。4.3.1.4MUG培养基促生长能力、指示能力检查：分别接种少量大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，在30-35C培养于18-24小时，与对照培养基比较生长应生长良好，并分别于5小时，24小时紫外灯下观察应呈现蓝白色荧光，观察后沿管壁加入数滴靛基质试液，液面与对照培养基管比较颜色一致，即呈现玫瑰红色。5修订情况：6附件附件1营养琼脂培养基适用性检查记录Z11-Z1-SOP-070-01附件2玫瑰红钠培养基适用性检查记录Z11

8、-Z1-SOP-070-02附件3控制菌检查培养基适用性检查记录Z11-Z1-S0P-070-03营养琼脂培养基适用性检查记录Z11-Z1-SOP-070-01培养基名称：营养琼脂培养基仪器型号：样品培养基：批号：包装规格：数量：生产厂家：对照培养基：批号：包装规格：制造单位：国家食品药品检定研究院1.1 检查方法：中国药典2010版二部附录XIJ1.2 验证方法：中国药典2010版二部附录XIJ2.、计数方法验证2.1菌种：大肠埃希菌(CMCC(B)金黄色葡萄球菌(CMCC(B)枯草芽胞杆菌(CMCC(B)2.2菌液制备2.2.1取经35培养18-24小时金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽抱

9、杆菌的营养琼脂培养基培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成Im1含菌为50100cfu的菌悬液，做活菌计数用。2.3培养基适用性检查2.3.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各50-IOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂样品培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，同法制备对照培养基，置35培养48小时计数。结果见表I-Ao表I-A培养基适用性检查培养结果菌种类型样品培养基(A)对照培养基(B)AB(%)样品培养基菌与对照培养基上的菌落落形态对比皿1皿2A皿1皿2B大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,且菌落

10、形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。结果判定：实验人：年月日复核人：年月日玫瑰红钠培养基适用性检查记录培养基名称：玫瑰红钠培养基仪器型号：样品培养基批号：包装规格：数量：生产厂家：对照培养基批号：包装规格：制造单位：国家食品药品检定研究院1.1 检查方法：中国药典2010版二部附录XIJ1.2 验证方法：中国药典2010版二部附录XIJ2.、计数方法验证2.1 菌种：白色念珠球菌(CMCC(F)黑曲霉(CMCC(F)2.2 菌液制备2.2.1 取经25培养24小时白色念珠球菌改良马丁琼脂斜面培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液制成Im1含菌为50IOOcfu的菌悬液

11、，做活菌计数用。2.2.2 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养5天，加入3m1含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将抱子洗脱。然后倒出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成Im1含抱子数为50-IOOcfu的抱子悬液。2.3 培养基适用性检查2.3.1 取白色念珠球菌、黑曲霉各50-IOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾玫瑰红钠样品培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置25培养72小时，计数。结果见表I-A-I。2.4 表I-A-I培养基适用性检查培养结果菌种类型样品培养基对照培养基AB

12、(%)样品培养基菌与对照培养基上的菌落落形态对比皿1J12A皿1皿2B白色念珠球菌黑曲霉检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。结果判定：实验人：复核人：控制菌检查培养基适用性检查记录培养基：配制日期：年月一日实验日期：年月日仪器型号：一、菌液制备：大肠埃希菌编号：0.9%NaC1配制批号：取大肠埃希菌一支，于室温复苏转种预培养小时编号用3m10.9%无菌NaC1溶液10倍递增稀释至IOT-W8,以上各稀释级均置冰箱4-8C保存。二、每m1菌液含菌量的计数测-定。测定方法：取稀释后的菌液ImI（剩余

13、的菌液冷藏保存），置直径90的无菌平皿中，注入15-2OmI已经过适用性检查确定的温度不超过45的溶化的营养琼脂培养基，每稀释级每种培养基至少制备2个平板，培养温度为30C35C,培养3天。检验结果：大肠埃希菌于稀释级菌数在50-100CFU。三、检查结果：。 1胆盐乳糖培养基促生长能力检查胆盐乳糖培养基批号：配置批号：厂家：胆盐乳糖对照培养基批号：分别接种不大于IOOcfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在30-35培养18小时。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌O检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。结论： 2.麦康凯琼脂培养基促生长能力检查麦康凯琼脂培养基批

14、号:配置批号:厂家:麦康凯琼脂对照培养基批号:菌种类型被检培养基对照培养基AB(%)被检培养基菌与对照培养基上的菌落落形态皿1HI12匀A皿1皿2B大肠埃希菌检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。结论： 3.胆盐乳糖培养基抑制能力检查胆盐乳糖培养基批号：配置批号：厂家：胆盐乳糖对照培养基批号：分别接种金黄色葡萄球菌于被检培养基中和对照培养基中，同时各做一个阴性对照，在C培养一小时被检培养基与对照培养基比较，金黄色葡萄球菌检验标准：试验菌应不得生长。结论： 4.MUG培养基促生长能力、指示能力检查MUG培养基批号：配置批号：厂家：MUG对照培养基批号：分别接种少量大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，在30-35培养于18-24小时，与对照培养基比较生长,并分别于5小