2015年版《中国药典》通则0531 超临界流体色谱法通则.docx

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1、0531超临界流体色谱法超临界流体色谱法（supercritica1f1uidchromatography,SFO是以超临界流体作为流动相的一种色谱方法。超临界流体是一种物质状态。某些纯物质具有三相点和临界点。在三相点时，物质的气、液、固三态处于平衡状态。而在超临界温度下，物质的气相和液相具有相同的密度。当处于临界温度以上，则不管施加多大压力，气体也不会液化。在临界温度和临界压力以上，物质以超临界流体状态存在；在超临界状态下，随温度、压力的升降，流体的密度会变化。所谓超临界流体,是指既不是气体也不是液体的一些物质，它们的物理性质介于气体和液体之间，临界温度通常高于物质的沸点和三相点。超临界流体

2、具有对于色谱分离极其有利的物理性质。它们的这些性质恰好介于气体和液体之间，使超临界流体色谱兼具气相色谱和液相色谱的特点。超临界流体的扩散系数和黏度接近于气体，因此溶质的传质阻力小，用作流动相可以获得快速高效分离。另一方面，超临界流体的密度与液体类似，具有较高的溶解能力，这样就便于在较低温度下分离难挥发、热不稳定性和相对分子质量大的物质。超临界流体的物理性质和化学性质，如扩散、黏度和溶剂力等，都是密度的函数。因此,只要改变流体的密度，就可以改变流体的性质，从类似气体到类似液体，无需通过气液平衡曲线。通过调节温度、压力以改变流体的密度优化分离效果。精密控制流体的温度和压力，以保证在分离过程中流体一

3、直处于稳定的状态，在进入检测器前可以转化为气体、液体或保持其超临界流体状态。1.对仪器的一般要求超临界流体色谱仪的很多部件类似于高效液相色谱仪,主要由三部分构成,即高压泵（又称流体传输单元）、分析单元和控制系统。高压泵系统要有高的精密度和稳定性，以获得无脉冲、流速精确稳定的超临界流体的输送。分析单元主要由进样阀、色谱柱、阻力器、检测器构成。控制系统的作用是：控制高压泵保持柱温箱温度的稳定，实现数据处理及显示等。（1）色谱柱超临界流体色谱中的色谱柱可以是填充柱也可以是毛细管柱，分别为填充柱超临界流体色谱法（pSFC）和毛细管超临界流体色谱法（cSFC）o超临界流体色谱法依据待测物性质选择不同的色

4、谱柱。几乎所有的液相色谱柱，都可以用于超临界色谱，常用的有硅胶柱（S11）、氨基柱（NH2）、氨基柱（CN）、2-乙基毗咤柱（2-EP）等和各种手性色谱柱，某些应用也会使用G-和Cs等反相色谱柱和各种毛细管色谱柱。（2）流动相在超临界流体色谱中，最广泛使用的流动相是CO?流体。CO,无色、无味、无毒、易获取并且价廉，对各类有机分子溶解性好，是一种极好的溶剂；在紫外区是透明的,无吸收；临界温度31,临界压力7.38X106Pa在色谱分离中，CO2流体允许对温度、压力有宽的选择范围。由于多数药物都有极性，可根据待试物的极性在流体中引人一定量的极性改性剂，选择何种改性剂根据实验情况而定，最常用的改性

5、剂是甲醇，改性剂的比例通常不超过40%,如加入1%30%甲醇，以改进分离的选择因子值。除甲醇之外，还有异丙醇、乙月青等。另外，可加入微量的添加剂，如三氨乙酸、乙酸、三乙胺和异丙醇胺等，起到改善色谱峰形和分离效果，提高流动相的洗脱/溶解能力的作用。除CO?流体外，可作流动相的还有乙烷、戊烷、氨、氧化亚氮、二氯二氨甲烷、二乙基酸和四氢吠喃等。通常作为超临界流体色谱流动相的一些物质，其物理性质列于下表。表各种化学物质的临界压力、温度和密度物质分子质量临界温度临界压力、临界密度g/mo1KMPa（标准大气压）gc?二叙化碳（CoZ）44.01304.17.38(72.8)0.469水（HzO）18.0

6、15647.09622.064(217.755)0,322甲烷（CH。16.04190.4460(45.4)0.62乙烷（CiH6）30.07305.34.87(48.1)0.203丙烷（GH8）44.09369.84.25(41.9)0.217乙烯（GH。28.05282.45.04(49.7)0.215丙烯42.08364.94.60(45.4)0.232甲静(CQOH)32.04512.68.09(79.8)0.272乙醇（C?WOH）46.07513.9614(60.6)0.276丙酮(C3HeO)58.08508.14.70(46.4)0.278（3）检测器高效液相色谱仪中经常采用的检测器，如紫外检测器、蒸发光散射检测器等都能在超临界流体色谱中很好应用。超临界流体色谱还可采用GC中的火焰离子化检测器（FID）、氮磷检测器（NPD）以及与质谱（MS）、核磁共振（NMR）等联用。与HP1C-NMR联用技术相比，作为流动相的COz没有氢信号，因而不需要考虑水峰抑制问题。2.系统适用性试验照高效液相色谱法（通则0512）项下相应的规定。3.测定法（1）内标法（2）外标法（3）面积归一化法上述测定法的具体内容均同高效液相色谱法（通则0512）项下相应的规定，其中以内标法和外标法最为常用。