《快速核酸检测仪校准规范》征求意见稿.docx

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1、内蒙古自治区地方计量技术规范JJF（蒙）XXX-XXXX快速核酸检测仪校准规范Ca1ibrationSpecificationforRapidNuc1eicAcidDetectors（征求意见稿）xxxx-xx-xx发布XXXX-XX-XX实施内蒙古自治区市场监督管理局发布IJJF（蒙）XXXXXXXX06G快速核酸检测仪校准规范CaIibrationSpecificationforRapidNucIeicAcidDetectors归口单位：内蒙古自治区市场监督管理局主要起草单位：内蒙古自治区计量测试研究院满洲里市检验检测中心内蒙古自治区人民医院参加起草单位：赤峰市产品质量检验检测中心本规范委

2、托内蒙古自治区计量测试研究院负责解释本规范主要起草人：许春彬（内蒙古自治区计量测试研究院）王辉（满洲里市检验检测中心）张晓燕（内蒙古自治区人民医院）朴维英（内蒙古自治区人民医院）梁先红（内蒙古自治区计量测试研究院）参加起草人：李明（满洲里市检验检测中心）杨涛（内蒙古自治区人民医院）刘大伟（赤峰市产品质量检验检测中心）引言(II)2引用文件（1）3术语（1）4概述（3）5计量特性（3）6校准条件（3）6.1 环境条件（3）6.2 测量标准及其他设备（3）7校准项目和校准方法（4）7.1 校准项目（4）7.2 温度校准（4）7.3 样本检测重复性（10）8校准结果表达（10）8.1校准记录（10）

3、8.2校准结果的处理（10）9复校时间间隔（11）附录A校准结果记录参考格式（12）附录B校准证书内页参考格式（15）附录C快速核酸检测仪温度偏差的测量不确定度评定示例（16）引言JJF1071-2010国家计量校准规范编写规则、JJF1oo1-2On通用计量术语及定义和JJF1O59.1-2012测量不确定度评定与表示共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列规范。本规范为首次发布。快速核酸检测仪校准规范1范围本规范适用于将核酸提取、扩增检测一-体化运行，基于控温基因扩增技术的快速核酸检测仪的校准，其他类似设备也可参照本规范进行校准。2引用文件本规范引用了下列文件：JJF1007-2007温度计

4、量名词术语及定义JJF1101-2019环境试验设备温度、湿度参数校准规范JJF1265-2010生物计量术语及定义JJF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。3术语JJF1265-2010、JJF1527-2015YY/T1173-2010中界定的以下术语和定义适用于本规范。3.1核酸nuc1eicacid由核甘酸或脱氧核甘酸通过3,5-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信

5、息。包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）两类。来源:JJF1265-2010,4.423.2阈值循环数Ctcyc1ethresho1d实时检测扩增过程中，反应管内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前315个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数（Ct）O来源：YY/T1173-2010,3.153.3等温扩增技术isotherma1amp1ificationtechno1ogy反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物来达到快速核酸扩增目的技术。3.4拷贝数copynumber特定基因（可

6、以是质粒）在某一生物体基因组中所含的个数，以及每个生物细胞中所具有的转录物（RNA）个数。来源：JJF1265-2010,4.293.5温度偏差temperaturedeviation恒温过程中模块内实测温度平均值与设定温度之差。3.6平均升温速率meanheatingrate升温过程中模块单位时间内上升的平均温度度数。来源：YY/T1173-2010,3.43.7平均降温速率meancoo1ingrate降温过程中模块单位时间内下降的平均温度度数。来源：YY/T1173-2010,3.63.8平均过冲温度averagetemperatureovershoot从基础温度升温或降温至设定温度时模

7、块内实测温度偏离设定温度的幅度。3.9温度波动度temperaturef1uctuation恒温过程中模块内实测温度随时间的变化量。3.10持续时间durationtime恒温过程中模块内维持温度的时间。24概述快速核酸检测仪通常是基于实时荧光PCR技术或等温扩增技术的小型化检测仪器，将核酸提取和扩增整合到一个设备，在短时间内完成对核酸的扩增检测。快速核酸检测仪主要由反应模块、光源模块、磁导模块、加热模块、光电检测系统、显示模块等部分组成,需与专用的核酸检测试剂盒配套使用。5计量特性仪器计量特性见表1。表1快速核酸检测仪计量特性类型实时荧光PCR技术等温扩增技术温度偏差+0.5C平均升温速率3

8、eCs一平均降温速率2Cs-平均过冲温度2C一温度波动度一0.5oC持续时间偏差+10%-样本检测重复性5%注：以上所有技术指标不用于合格性判别，仅供参考。6校准条件6.1 环境条件温度：（1040）；相对湿度：不大于85%06.2 测量标准及其他设备测量标准、其他设备及技术要求见表2。表2测量标准、其他设备及技术要求序号名称规格技术要求i快速核酸检测仪专用无线温温度(0120)分辨力：不低于o.orc最大允许误差：01C采样时间间隔：0.Is2度校准装置时间/分辨力：不低于Is最大允许误差：1sh3新型冠状病毒核酸标准物质ORF1ab基因定值有证标准物质N基因定值有证标准物质4移液器（2.5

9、、10、100、200、1000、5000）U1检定合格注：1、也可以选择满足技术要求的其他测量标准。2、本规范采用新型冠状病毒核酸标准物质为例，若快速核酸检测仪用于检测其他病原体可采用相应的有证标准物质。7校准项目和校准方法7.1 校准项目基于实时荧光PCR技术和等温扩增技术的快速核酸检测仪校准项目见表3。表3快速核酸检测仪校准项目项目实时荧光PCR技术等温扩增技术温度偏差+平均升温速率+一平均降温速率+-平均过冲温度+一温度波动度一+持续时间偏差+一样本检测重复性+注：+表示应校准：-表示不校准7.2温度校准7.2.1测量方法独立控温模块快速核酸检测仪可逐个模块校准或同时对多个模块分别校准

10、，参照图1所示。非独立控温的快速核酸检测仪作为一个整体进行温度校准，以8通道、16通道快速核酸检测仪为例，布点遵循均匀分布的原则，可参照图2(a)和图2(b)所示，每增加8通道可增加3个点。多模块或多通道的快速核酸检测仪以所有布点计算结果的最大值作为测量结果。基于实时荧光PCR技术的快速核酸检测仪控温程序设置可参照表4进行，设置温度采样间隔为O.1s。基于等温扩增技术的快速核酸检测仪温度设定程序可参照表5进行。将专用无线温度校准装置置入样品槽中，启动温度测量标准，自动采集并记录整个循环程序温度数据。图1独立模块快速核酸检测仪布点示意图12345678图2(a)8通道快速核酸检测仪布点示意图12

11、345678AB-2-34568图2(b)16通道快速核酸检测仪布点示意图表4基于实时荧光PCR技术快速核酸检测仪控温程序步骤设定温度点/设定温度持续时间/s循环数15010X129010X13401064951057010X166010Xf1174010Xf11表5基于等温扩增技术快速核酸检测仪控温程序步骤设定温度点/设定温度持续时间min温度采样间隔/s155103026010307.2.2温度偏差计算独立模块或单通道的温度偏差按照公式（1）、（2）分别计算。阳=Z-T（1）Tc-Ti（2）式中：AT；模块温度偏差，;Tc该模块温度实测值的平均值，C；Ts模块设定温度，；Ti该模块校准装置

12、第i次的测量值，C；测量次数。7.2.3平均升温速率计算（实时荧光PCR技术）从40升至95过程中截取50至90的温度曲线如图3所示（取温度达到50和90后采集的第一个值）计算升温速率，平均升温速率按照公式（3）、（4）计算:匕=(D(3)(4)式中:匕模块第i个循环升温速率，/s；匕一一模块平均升温速率，cs；T,50C温度点测量值，；TB90C温度点测量值，C；t从7；到达。的时间，s；出累积循环数，按本规范程序设置为6o图3升降温速率取点示意图7.2.4平均降温速率计算（实时荧光PCR技术）从95降至40C过程中截取90C至50C的温度曲线如图3所示（取温度降至900C和50C后采集的第

13、一个值）计算降温速率，平均降温速率按照公式（5）、（6）计算:(5)(6）式中:Vd1模块第i个循环升温速率，/s；匕一一模块平均升温速率，。C/s；TA50温度点测量值，；TB90C温度点测量值，；从到达北的时间，s；累积循环数，按本规范程序设置为6o7. 2.5平均过冲温度计算（实时荧光PCR技术）模块温度从40升温至设定温度95或从95降温至设定温度40C时模块内实测温度偏离设定温度的温度值，如图4所示。平均升温过冲温度按照公式（7）、（8）计算，平均降温过冲温度按照公式（9）、（10）计算。Gc=7-95c(7)_1HTmaX=-ZEmaX加7(8)Krc=T*nin-4c(9)Tmin=Timin(10)式中：7;5模块升温平均过冲温度，C；（95C一一模块设定温度值，95；Tnux该模块各循环升温实测最大过冲温度平均值，；Timax模块第i个循环升温实测最大过冲温度，；T1o,模块降温平均过冲温度，；&）C一一模块设定温度值，40；Tmin该模块各循环降温实测最大过冲温度平均值，；min模块第i个循环降温实测最大过冲温度，；团累积循环数，按本规范程序设置为6。图4单循环过冲温度示意图1. 2.6温度波动度计算(等温扩增技术)温度波动度按照公式(H)计算：5二3&xFn)(1式中：7j模块温度波动度，；Tmax模块恒温时间