革兰氏染色原理方法及其注意事项.docx

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1、革兰氏染色原理、方法及其注意事项目录革兰氏染色原理、方法及其注意事项1原理1革兰氏染色方法2注意事项4原理用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基PH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。菌体被染成紫色的是革兰氏阳性菌（

2、G+）;菌体被染成红色的为革兰氏阴性菌（G）。简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态,简单染色不能辨别细菌细胞的构造。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就飒色。G+菌细胞壁中

3、肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孑1缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。革兰氏染色方法1、以酒精擦拭玻片，在酒精灯上干燥后，用接种环挑取一环灭菌的去离子水或生理盐水到载玻片上，挑取少量纯培养物在水滴上涂抹至均匀分散，将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定。2、滴加结晶紫染色液1-2滴，染1分钟，用去离子水轻轻水洗。3、待干，滴加革兰氏碘液，作用1分钟，用去离子水轻轻水洗。4、滴洗脱色剂（95%酒精），不时摇动玻片,直至无紫色脱落为止（约1020秒）,用去离子水轻轻水洗。5、待干，滴加沙黄复染液,复染30秒。用去离子轻轻水洗，待玻片干燥后镜检。6、油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌；呈红色者为革兰氏阴性菌。注意事项12 .需要使用新鲜的细菌培养物进行染色，否则可能会影响染色结果。3 .在染色过程中需要保持染色液的温度恒定，一般为室温或37。C左右。4 .革兰氏染色是一种快速的初步分类方法，但并不是所有细菌都能通过此染色方法进行分类，需要结合其他鉴定方法进行确认。5 .在染色过程中,需要注意避免细菌样品的过度洗涤或染色时间过长，否则可能会影响染色结果。6 .在染色之前需要对细菌样品进行适当的处理,如制备细菌涂片或液体悬浮液等。7 .染色液的准备和使用需要按照标准操作程序进行，以确保染色结果的准确性和可重复性。