镉对肝细胞中PPP2R1A基因启动子区甲基化及其转录水平的影响.docx

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1、镉对肝细胞中PPP2RIA基因启动子区甲基化及其转录水平的影响张玉静，廖昆，夏斌，高艳芳，殷花，何承勇，林育纯，林忠宁*厦门大学公共卫生学院(福建厦门，361102)；中山大学公共卫生学院(*通讯作者：；国家自然科学基金(NO.,)、广东省自然科学基金重点项目(NO.S9)资助)【摘要】目的：DNA甲基化作为经典表观遗传调控方式，参与了基因转录调控和致癌作用等过程。镉(Cd)及其化合物(Cd?+)是常见的环境污染物，可诱导遗传毒性损伤(如DNA链断裂)；有研究发现长期Cd暴露可介导多种基因(如R4SSF/A、66等)启动子区高甲基化状态，从而抑制基因的转录。为探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)功能

2、活性调控在镉毒性中的作用机制，本研究拟分析镉处理细胞中PP2A-A基因(PPP2R/A)启动子区甲基化状态及其转录水平的改变。方法：采用永生化人正常肝102细胞及肝细胞癌H叩G2细胞为研究对象，给予不同浓度(20、40、60M)的CdCI2处理24h,以不同剂量(2.5、5.0、10M)甲基转移酶抑制剂5-Aza处理细胞48h作为阳性对照，并给予5-Aza预处理48h后给予CdCI2处理24h进行验证；qRT-PCR检测各处理组细胞中PPP2RAmRNA水平。40MCdeI2处理两种不同细胞24h后，提取各处理组细胞基因组DNA,重亚硫酸盐修饰法(BSP)处理，分别采用非甲基化和甲基化引物PC

3、R获得PPP2R1A近端启动子区(-448+237nt)目的片段，采用TA克隆测序验证和分析各CPG二核昔酸位点甲基化比例.结果：与阴性对照组比较，各剂量CdC12处理组102细胞中PPP2RAmRNA降低倍数分别为0.95、0.82、0.77,在HepG2细胞中降低倍数分别为0.95、0.93和0.87,两细胞改变趋势相同、且均具有明显的剂量依赖性(P0.05).与5-Aza处理组相比，5-Aza+CdC12处理组102和HepG2细胞中PPP2RIAmRNA均略降低，但差异无统计学意义。甲基化测序发现，对照组和CdCI2处理组102细胞中PPP2R1A基因启动子区CpG岛甲基化比例分别为2.3%和4.2%,在HepG2细胞分别为3.8%和5.0%。结论：外源化学物CdCI2可诱导肝细胞中PPP2R1A基因转录水平降低，可能与镉能够引起目的基因启动子区甲基化状态改变有关。提示PP2A亚基基因的表观遗传学调控可影响镉诱导的肝细胞功能。关键词：镉；PPP2R/A基因；启动子区甲基化