骆驼β内啡肽βEPELISA试剂盒说明书.docx

《骆驼β内啡肽βEPELISA试剂盒说明书.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《骆驼β内啡肽βEPELISA试剂盒说明书.docx（3页珍藏版）》请在第一文库网上搜索。

1、骆驼B内啡肽（Bep）e1isa试剂盒说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于溯定骆驼血清，血浆及相关液体样本中B内啡肽（B-EP）的活性。上海乔羽生物科技有限公司E11SA试剂盒说明书关键词：EuSA试剂盒说明书、酶联免疫试剂盒、分析检测试剂盒实验原理：骆驼B内啡肽（-EP）E1ISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中骆驼内啡肽（B-EP）水平。用纯化的骆驼B内啡肽（B-EP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B内啡肽（B-EP）,再与HRP标记的羊抗骆驼抗体结合，形成抗体-抗原麻标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP前的催化下转化成蓝色，并在酸的

2、作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的B内啡肽（B-EP）呈正相关。用醯标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中骆驼B内啡肽（B-EP）浓度。样本处理及要求：1 .血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2 .血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3 .尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存

3、过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4 .细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到IOO万/m1左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5 .组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4o用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心

4、20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融.7 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酹的（HRP）活性。骆驼B内啡肽（-EP）E1ISA试剂盒操作步骤1 .标准品的稀释与加样：在酣标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品10（）1,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50H1,混匀；然后从第一孔、第二孔中各取IOOg分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50U1,混

5、匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50In弃掉，再各取50I分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50u1,混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50U1分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50U1,混匀后从第七、第八孔中分别取50UI加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50M1,混匀后从第九第十孔中各取50弃掉。（稀释后各孔加样量都为50U1,浓度分别为60ng1,40ng1,20ng1,10ng1,5ng1）。2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及前标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在醐标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液

6、401,然后再加待测样品IOM1（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于醐标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸储水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酣：每孔加入酸标试剂50U1,空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A50U1,再加入显色剂B50M,轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液50U1,终止反应（此时蓝色立

7、转黄色）。11 .测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，醐标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）

8、后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酣标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准。骆驼内啡肽（B-EP）E1ISA试剂盒计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒性能：1 .样品线性同归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。2 .批内与批间应分别小于9%和15%检测范围：2ng1-80ng1保存条件及有效期：1 .试剂盒保存：；2-80Co2 .有效期：6个月.骆驼B内啡肽(-EP)E11SA试剂盒