猪瘟病毒抗体ELISA检测方法.docx

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1、猪瘟病毒抗体E1ISA检测方法原理猪瘟病毒(CSFV)E1ISA抗体检测试剂盒，酶标板包被猪瘟病毒E2抗原(gp55蛋白)，如果待检样品中含有猪瘟抗体，与其包被的抗原结合后，将阻断HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被的抗原结合后，将阻断的HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被抗原的结合，从而减少显色反应。试剂IX洗涤液：10X洗涤缓冲液用蒸偏水稀释10倍配成IX洗涤液、TMB底物液。设备耗材单道微量移液器和吸头、计时器、加样槽、蒸储水、酶标仪(450nm)Q操作步骤1试剂盒内所有组份取出，在恒温箱(25+3。C)中放置至少60分钟，恢复至室温，打开铝箔袋取出抗原包被板。2 .在稀释板中加入701样品

2、稀释液，各孔加入70U1血清样品。同样比例稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC),充分混匀。于抗原包被板孔中分别加入IOOU1稀释后的样品以及IOOU1稀释后阴性对照血清(NC)和阳性对照血清(PC)o盖上封板膜，室温(253。C)下孵育60分钟。3 .洗板，弃去孔中液体，每孔加300U11倍洗涤液，洗涤3次。最后一次洗涤后将酶标版在吸水纸上轻轻拍干，严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。每孔加入IOoU1CSFVE2HRP标记抗体。盖上封板膜，室温（253。C）下孵育30分钟。4 .重复步骤1、2、3o5 .每孔加入1001TMB底物液。6 .盖上封板膜，室温（253C）下孵育15分钟。每

3、孔加入501终止液，终止酶促反应。使用45Onm波长测量吸光度值。7 .结果判定与计算。用酶标仪测定0D450nm0结果判读1 .阴性对照（Ne）OD45Omin平均值0.7；阳性对照（PC）P1平均值50沆2 .计算公式通过下面公式计算样品竞争值觥PD。PI（阻断百分率）=（NCOD均值-样品OD值）NCOD均值100%如果结果可疑，检查样品（是否被细菌污染等）并再次检测。如果再次检测后结果仍可疑，检查农场的流行病学情况并再次收集样品重新检测。PI值40%40%判定阳性阴性注意事项1 .请勿使用过期的试剂。2 .不同批次的试剂盒试剂请勿混用。3 .小心避免污染试剂盒的组分。4 .检测仪器设备等（移液器、吸头、恒温箱、洗板机和酶标仪）是否可以正常使用。5 .每一次加样品前请更换移液器吸头。6 .使用试剂时注意避免接触皮肤和粘膜，所有在诊断检测中用到的原材料应当进行无害化处理。7 .试剂盒的所有试剂在使用前必须在室温253。C平衡30分钟。8 .每个加样槽对应一种试剂，请勿重复使用。9 .所有试剂储存在28（。使用前恢复至室温，使用后再冷藏保存。