猪圆环病毒的实验室诊断技术.docx

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1、猪圆环病毒的实验室诊断技术猪圆环病毒病是由猪圆环病毒感染引起的重要传染病，猪圆环病毒是(PCV)德国学者首次在猪肾传代细胞系PK-15细胞中发现的，并将其命名为猪圆环病毒。猪圆环病毒属于圆环病毒科，圆环病毒属，是单股负链环状DHA病毒，根据PCV的致病性、抗原性及核酸序列，将PCV病毒分为PCVT和PCV-2两种类型。PCV-I和PCV-2核酸序列上同源性不高，但基因组结构类似，PCVT无致病性，临床感染很常见，普遍认为PeVT型存在于猪源传代细胞系中，由于无致病性，难以通过临床症状或病理表现判断是否感染。而PCv-2型与猪群中的多种疾病相关，临床症状和病理表现都比较明显。PCV-2型主要引起

2、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病复合征、仔猪多系统衰竭综合征等，还可以与猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒交叉混合感染，致病性强，给养猪业带来巨大的经济损失。目前，我们对PCV的诊断主要依靠病理变化和临床症状初步判断，再经实验室血清学和分子生物学检测确诊。1 .血清学检测1.1 酶联免疫吸附试验(E1ISA)将被检血清1:400稀释，对照血清按照11OO稀释，当被检样品中OD值3倍于阳性对照OD值时判定为阳性，否则为阴性。1.2 间接免疫荧光实验（IFA）主要用于病毒分离效果的鉴定及病理组织或猪源细胞PCV感染情况的检测。将病变组织冷冻切片或将病料接种PK-15细胞，用丙酮固定，加兔抗高免血清和

3、细胞培养物反应，同时与正常细胞或切片相比较，对PCV进行检测和定型，镜检出现荧光抗原抗体复合物则证明PCV阳性。IFA操作简便快速，成本较低，应用广泛。2 .分子生物学技术3 .1多重PCR（聚合酶链式反应）一种特殊的PCR检测方法，在同一反应中加入多对引物同时扩增出两种或两种以上的病毒DNA,该方法方便快捷，用时短，在临床检测中使用率很高。4 .2原位杂交试验（ISH）根据所用探针的特异性不同，可将原位杂交试验分为3种，只能检测PCV但不分型的ISH；可对PCV-I和PCV-2进行分型的ISII；PeV-2或PCV-2与PRRSV（猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒）混合感染的ISHo5 .讨论临床症状和病理变化只可作为初步诊断，因猪群中普遍存在PCV-2抗体，因此单一抗体阳性不能确诊，需结合实验室检测做出判断，检测方法各有优缺点，可根据实际情况选择最优检测方法。