布鲁氏菌的实验室检测方法.docx
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1、布鲁氏菌的实验室检测方法荧光偏振方法(F1uorescencepo1arisationassay,FPA)是以荧光素标记物作为示踪剂来检测抗原/抗体相互作用的一种简便技术,该方法属于同源性分析,分析物不需进行分离,因而该法简便快捷。FPA诊断布鲁氏菌的特异性和敏感性几乎和竞争E1ISA(Competitiveenzyme-Iinkedimmunosorbentassay,C-E11SA)相同,一次检测仅需15min,即可完成上百份样品的检测,可应用于动物群体布鲁氏菌病的检疫、筛查和净化。FPA检测方法在某些发达国家已经得到了大量应用,并经研制开发了商品化FPA检测试剂盒。而我国对FPA检测方法
2、的研究起步较晚,目前尚无商品化FPA检测试剂盒,进出口贸易中牛、羊布鲁氏菌病FPA检测方法均依赖于使用进口试剂盒,因此开发布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法有其现实意义。本研究使用异硫氟酸荧光素(F1uoresceinisothiocyanate,FITC)标记的布鲁氏菌光滑型1PS的小分子片段脂多糖-0-链(O-PO1ySaCCharide,OPS)作为抗原,通过对标记抗原、反应条件、结果判断标准等多方面条件的优化,建立敏感性和特异性良好的布鲁氏菌荧光偏振方法,为多种动物布病检测提供快速高通量的新技术手段。材料与方法1材料1.1菌种:猪布鲁氏菌S2菌株(CVCC70502)由本实验室保存。1.2实
3、验用血清:布鲁氏菌病阳性血清国家标准品由本实验保存,布鲁氏菌病阴、阳性血清样本由本实验采集并保存。13主要试剂和仪器:布鲁氏菌荧光偏振试剂盒购自Diachemix公司;胰大豆肉汤(TSB)和胰大豆琼脂(TSA)购自美国BD公司;异硫氟酸荧光素(F1TC)、表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodiumdeoxycho1ate)三乙胺购自Sigma公司;SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购自康为世纪公司。低温离心机购自Sigma公司;超声破碎仪购自新芝生物科技有限公司;PowerpacUniversa1通用型电源购自美国Bio-Rad公司。目前,国内主要采取的布鲁氏菌病血清学检测方法有虎红平板凝集试验、试管凝集
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