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1、临床医学检验技术(中级)高频考点一、血涂片的制备I、载玻片:新的载玻片常有游离碱质,应用铝酸清洗液或10%盐酸浸泡24小时,然后再彻底清洗。2、血涂片制备方法手工推片法(1)薄血膜推片法采血:将新鲜血液1滴置于载玻片一端的Icm处或整片的3/4处。制备血涂片:右手持推片在血滴的前方后移接触血滴,使血滴沿推片边缘展开,匀速、平稳的向前推动。干燥(2)厚血膜涂片法新鲜血滴位于载玻片中央,用推片的一角由内向外旋转涂布,制成一个厚薄均匀的圆形血膜。适合检查疟原虫、微丝蝴等。血涂片质量问题原因不规则间断或尾部过长推片污染、速度不均、载玻片污染有空泡载玻片被油脂污染血膜过长或过短角度不佳或血滴太小无尾部血
2、滴太大两侧无空隙推片太宽或展开太宽血膜过厚血滴大、血液粘度高、推片角度大、速度快二、血涂片染色Wright染色Giemsa染色染色原理物理吸附和化学亲和作用物理吸附和化学亲和作用染色步骤染液PBS缓冲液蒸偏水冲洗干燥甲醇固定PBS缓冲液稀释的Giemsa染液蒸储水冲洗干燥染色步源的不同染液为伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。染料放置的时间越久,染色效果越好。方法学评价最常用的染色方法。对胞质成分及中性颗粒等染色效果好。对胞核和寄生虫着色好。第二章血液的一般检查第一节红细胞检查一、红细胞计数【参考区间】成年:男性(4.0-5.5)X1071女性(3.5-5.0)X1071新生儿:(6.0-7.0)10
3、,71医学决定水平:高于6.8X1071,应采取相应的治疗措施;低于3.5X10)1可诊断为贫血;低于1.5X1021应考虑输血。【检验原理】有显微镜法和血液分析仪法显微镜法:用等渗的红细胞稀释液(Hayem液)将血液标本稀释一定倍数后,充入改良牛鲍计数板中,在显微镜下计数一定区域内的红细胞数量,再换算出没升的红细胞数量。改良牛鲍计数板:WBCWBCRBC/P1TWBCWBC四角的四个大方格为白细胞的计数区域,中间大方格被划分成25个中方格,位于正中和四角的5个中方格为红细胞和血小板的计数区域。【临床意义】1、生理性变化增高:缺氧;雄激素增高;肾上腺皮质激素增多;长期重度吸烟;药物影响;静脉压
4、迫时间2分钟减低:主要见于生理性贫血(生长速度过快,导致造血原料相对不足;老年人造血功能减退;妊娠中晚期血容量明显增多,使红细胞数量相对减少;长期饮酒)2、病理性变化增多相对性增多见于血容量减少使红细胞相对增多,如呕吐、腹泻、大面积烧伤、多汗等。绝对性增多继发性:组织缺氧、EPO增高,如慢性心肺疾病、肾癌、肝癌等。原发性:真性红细胞增多症。减少(见于各种原因导致的贫血)红细胞生成减少骨髓功能衰竭:再障。造血物质缺乏或利用障碍:缺铁贫、铁粒幼贫、巨幼贫等。红细胞破坏增多红细胞内在缺陷:膜缺陷(遗传性球形红细胞增多症)、酶缺陷、血红蛋白异常(珠蛋白生成障碍性贫血)。红细胞外在异常:免疫反应(新生儿
5、溶血病、血型不合输血后溶血病)、机械性损伤(行军性血红蛋白尿)、疾病(疟疾、脾亢)。红细胞丢失急、慢性失血性贫血。【参考区间】成年:男性120160g1女性11(150g1新生儿:170200g1【临床意义】与红细胞计数一起判断贫血。根据Hb浓度可将贫血划分为4度:轻度贫血120g1(女性110g1);中度贫血90g1;重度贫血60g1;极重度贫血30g1;当RBC1.510121,Hb45g1时,应考虑输血。【检验原理】检验方法检验原理方法学评价HiCN测定法血红蛋白中的亚铁离子被高铁氟化钾氧化为高铁离子,血红蛋白转化为高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与鼠离子反应生成HiCN0HiCN最大吸收波峰
6、为540nm,波谷为504mo为WHO和ICSH的参考方法。但KCN有剧毒,且不能测定SHboSDS-Hb测定法比色法。血液中处SHb外的各种Hb均可与低浓度的SDS反应,生成SDS-Hb棕红色化合物。吸收波峰在538nm,波谷在500nmo次选方法。试剂无毒。但SDS质量差异大,消光系数未定。三、红细胞形态检查【检验原理】显微镜法和血液分析仪法。【临床意义】正常的红细胞形态为:平均直径在7.2m,双凹圆盘状,大小相对均一;中央为生理性淡染区,大小约为红细胞直径的1/3;胞质内无异常结构。异常形态红细胞:分为大小、形状、血红蛋白含量、结构和排列异常异常红细胞形态、机制临床意义大小异常小红细胞1
7、0mo中央染色深。巨幼贫、溶血性贫血。巨红细胞15Umo巨幼贫、肝病。大小不均RBC之间直径相差1倍以上。增生性贫血(尤其是巨幼贫)。形态异常球形无淡染区遗传性球形红细胞增多症椭圆形与细胞骨架蛋白异常有关遗传性椭圆形红细胞增多症靶形中央身染,外围苍白边缘又深染。Hb组成和结构变异珠蛋白生成障碍性贫血口形生理性淡染区呈扁平状。细胞膜先天性缺陷。遗传性口形红细胞增多症镰形缺氧,HbS溶解度降低。镰状细胞性贫血棘形突起间距、长宽不等。先天性B-脂蛋白缺乏症、乙醇中毒、慢性饥饿。锯齿状突起排列均匀、大小一致C丙酮酸激酶缺乏症、尿毒症。泪滴形泪滴样骨髓纤维化新月形新月形PNH角形红细胞表面有数个粗大的角
8、样突起D1C裂片红细胞大小不一DIC形态不整发生无规律的改变巨幼贫血红蛋白含量异常低色素性Hb含量明显减少。生理性淡染区扩大,染色淡。缺铁贫、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼贫。高色素性Hb含量增高。生理性淡染区消失,整个RBC着色深。巨幼贫、溶贫。嗜多色性胞质内有少量的RNA与Hb并存。各种增生性贫血。细胞着色不一同一片中,色素不一致铁粒幼贫。结构和排列异常豪焦小体核碎裂或溶解后所剩余部分,常与卡波环同时存在。脾切除、脾功能下降;巨幼贫;溶血贫。卡波环核膜或纺锤体残余物。铅中毒、恶性贫血。嗜碱性点彩红细胞胞质内有灰蓝色点状颗粒。铅中毒有核红细胞释放功能紊乱白血病、严重缺氧、骨髓转移性肿瘤。缗钱状
9、血浆中的纤维蛋白原和球蛋白含量增高,减弱了RBC之间的排斥力。多发性骨髓瘤红细胞自凝冷凝集、免疫性因素冷凝集综合征、自身免疫性溶血性贫血。四、血细胞比容测定【参考区间】成年:男性0.40-0.50;女性0.37-0.48。新生儿:0.470.48【检验原理】温氏法和微量法。血液离心后分为5层,自上而下分别是:血浆曾、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原血红蛋白层和红细胞层。读取的结果为还原血红蛋白层+红细胞层。【临床意义】HCT减低是诊断贫血的指标。HCT的增多或减少与血浆量的多少关系密切。若红细胞数量正常,血浆量增加,HCT为相对性减少,为假性贫血。机制原因减低红细胞减少各种贫血、出血血浆增
10、多妊娠中晚期、原发性醛固酮增多症增多红细胞增多真性红细胞增多症、肿瘤、缺氧、EPO增加血浆减少腹泻、呕吐、大量出汗、多尿五、红细胞平均指数红细胞平均指数包括:MCV、MCH、MCHC【计算方法】计算方法及参考区间指数含义公式参考区间MCV单个红细胞体积的平均值HCTRBC*10,sf180100MCH单个红细胞中血红蛋白含量的平均值HbRBC*1012pg2634MCHC全部红细胞血红蛋白浓度的平均值Hb/HCTg/1320360【临床意义】用于贫血形态学分类以及提示贫血可能的原因。MCVMCHMCHC贫血分类贫血正常正常正常正细胞正色素再障、急性失血增高增高正常大细胞性各种造血物质缺乏或利用
11、不良减低减低正常单纯小细胞性慢性感染减低减低减低小细胞低色素缺铁贫、慢性失血贫血MCV/RDW分类法MCVRDW贫血类型常见疾病或原因减低正常小细胞均一性单纯杂合子珠蛋白生成障碍性贫血增高小细胞非均一性缺铁品、B-珠蛋白生成障碍性贫血正常正常正细胞均一性再障、急性失血、增高正细胞非均一性铁粒幼贫、骨髓纤维化增高正常大细胞均一性骨髓增生异常综合征增高大细胞非均一性巨幼贫六、网织红细胞计数【参考区间】成人:0.5%-1.5%新生儿2.0%6.0%【临床意义】RET是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞,胞质中残存的RNA经活体染料(新亚甲蓝或煌焦油蓝)染色后,形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀
12、物。RET的分型 口1型丝球型:仅存在于骨髓中 口II型网型:大量存在于骨髓中,极少见于外周血m型破网型:少量存在于外周血 IV型点粒型:主要存在于外周血检测目的:评价骨髓的增生能力且可以判断贫血的类型:RET增多:骨髓造血功能旺盛,见于各种增生性贫血,尤其是溶贫。RET减少:表示无效红细胞造血,见于非增生性贫血和慢性贫血,如缺铁贫、巨幼贫、再障等。【检测方法】Miner窥盘计数法RET百分率二大方格内RET数/(小方格内RET数*9)七、嗜碱性点彩红细胞【参考区间】0.03%【检验原理】嗜碱性点彩红细胞为不完全成熟的红细胞,胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒,经亚甲蓝染色,细胞内可见到深染的
13、颗粒;但以Wright染色,则在粉红色的胞质内出现蓝黑色颗粒。其增高对慢性金属中毒具有辅助诊断价值。主要见于铅、汞等重金属中毒。八、红细胞沉降率测定血沉,指在规定条件下,离体的抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。【检验原理】魏氏法:抗凝血室温下垂直于血沉架1小时后,读取血浆的高度。自动血沉仪法:根据红细胞下降过程中血浆浊度的改变,采用光电比浊法。红细胞下沉分为三个阶段:红细胞缗钱状聚集期约IOmin;红细胞快速沉降期约40min;红细胞堆积期约IOmino【参考区间】(魏氏法)男性015mmh女性020mmh影响血沉的因素有:变化影响因素评价血浆纤维蛋白原、球蛋白、胆固醇、甘油增快三酯增高红细胞大红细胞(易形成缗钱状)、贫血感染某些病毒、细菌的代谢产物和异常抗体中和红细胞表面的负电荷药物葡萄糖、口服避孕药、维生素A等标本及物理条件标本溶血、血沉管倾斜、温度过高减慢血浆白蛋白、糖蛋白、磷脂酰胆碱增高红细胞数量增加、大小不均(不利于缗钱状形成)物理条件温度过低、血沉管不洁净药物阿司匹林、奎宁【临床意义】改变机制或疾病增快生理性儿童期红细胞数量生理性低下;女性较男性纤维蛋白原含量高,所以血沉较男性快;月经期