浙江省自然科学基金项目申请书范文临床外科学.docx

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1、申报类别:项目名称:申请者:电话:依托单位:通信地址:邮政编码:E-mai1:申报日期:同行评议组别临床外科学项目编号浙江省自然科学基金申请书一般项目脂氧素A4抑制S1RS治疗重症胰腺炎及其机制研究浙江省自然科学基金委员会二OXX年制基本信息申请者信息姓名性别出生日期最终学位获学位年份职称主要研究领域E-mai1电话个人网页依托单位证件类型证件号码申请者是否近三年调入在浙单位工作调入时间申请者曾主持的浙江省自然科学基金资助项目编号：申请者止在主持的国家和省部资助经费在20万兀及以上的研究项目名称、来源和研究期限：项目基本信息项目名称脂氧素A4抑制SIRS治疗重症胰腺炎及其机制研究申报类别一般项

2、目研究属性前瞻性应用基础研究同行评议组别医药科学/临床外科学依托基地名称预计研究年限20XX年01月20XX年12月总经费预算XX万元申请经费XX万元项目研究目标、内容和意义简介(限400字)目标：阐明脂氧素A4(1XA4)对全身炎症反应综合征(SIRS)发生各环节的体外抑制作用，进一步揭示1XA4在动物体内对SIRS的抑制作用和对重症胰腺炎的治疗作用，并探讨其作用机制。内容：一、通过体外实验观察：1XA4对原发刺激激活中性粒细胞、单个核细胞的影响。1XA4对激活后中性粒细胞、单个核细胞释放细胞因子的影响。(3)1XA4对由细胞因子参与刺激激活中性粒细胞、单个核细胞的影响。(4)1XA4对激活

3、后炎症细胞介导的组织脏器损害的保护作用。二、通过建立坏死性胰腺炎-S1RS大鼠模型了解1XA4在体内对SIRS的抑制和对重症胰腺炎的治疗作用机制。意义：以重症胰腺炎为代表危重病致死的主要原因绝大多数与S1RS有关，本研究期望应用1XA4阻断S1RS发生的瀑布样恶性连锁反应过程，探索抑制SIRS的新方法，为危重病的治疗提供新思路，开辟新途径，具有极其重要的意义。关键词(不超过4个)脂氧素A4;全身炎症反应综合征;重症胰腺炎;机制同行评议分组说明普通外科学重点资助方向重要疾病机理及防治研究脂氧素A抑制SIRS治疗重症胰腺炎及其机制研究4一、项目研究意义1991年，美国急诊医学会和胸科学会一致提出全

4、身炎症反应综合症(SIRS)的概念，它是由各种感染或非感染因素刺激宿主免疫系统，释放体液和细胞介质，发生过度炎症反应的结果。近年来的研究表明，SIRS是导致MoDS的病理生理基础。许多危重病，如急性坏死性胰腺炎、严重创伤、大面积烧伤、急性脑血管病、心肺复苏后、各种原因导致的组织缺血再灌注损伤、休克等均可诱发SIRS,在此基础上发生MODS,最终导致死亡。甚至有学者认为，“病人不是死于疾病本身，而是死于疾病引起的生理学异常”，而生理学异常往往表现为S1RS。因此，探索防治S1RS的新方法有着极其重要的临床意义和极大的社会学效益。局部炎症反应是一种生理性保护反应，失却这一局部反应或形成过度的激发反

5、应，则可发生S1RS。在SIRS的发生过程中，首先被激活的是单核巨噬细胞系统，后者释放出Q-TNF和I1-I等细胞因子级链反应的触发剂叫从而刺激多形核粒细胞(PMN)的活化，而PMN的过度激活在全身炎症反应过程中处于核心地位；过度激活的PMN释放大量破坏性炎症介质如氧自由基和脂质代谢产物，破坏功能完整的细胞，损伤内皮细胞，引起血小板黏附等一系列瀑布样的连锁反应。随着SIRS的加剧与恶化，终至MoDS或MOF,导致死亡。总之，SIRS是一个连锁性的反应过程，一旦触发即使原发因素消除或减弱，反应仍将继续。因此，如何打断这一恶性的瀑布样连锁反应过程，抑制SIRS,对危重病的防治有着极其重要的意义。为

6、寻找抑制SIRS的新方法，我们通过文献检索发现：近年来发现的内源性脂质抗炎介质一一脂氧素A4(1XA4)具有广泛的抗炎促消退作用，被誉为炎症反应的“刹车信号(brakingsigna1s)或停止信号(StOPSigrIa1S)，具有下列功能：对PMN有强烈的抑制效应；能促进单核-巨噬细胞(Mc)的趋化和对凋亡PMN的吞噬；可促进抗炎细胞因子I1-4的表达；并能减轻肺、肾等脏器的缺血再灌注损伤U%从这些作用机理来看，1XA4可能具有抑制S1RS作用，但至今尚无直接证据证实这一点。本项目旨在通过研究证实1XA4具有抑制SIRS的作用，并阐明其作用环节和作用机制。期望在危重病治疗的早期应用人工合成的

7、1XA4类似物抑制单核细胞、多形核粒细胞的过度激活，对SIRS起负调控作用，这将可能为SIRS的防治提供一种新的治疗方法，降低Mc）DS的发生率，提高危重病的抢救成功率，其临床意义与社会学效益不言而喻。浙江是一个经济工业大省，经济的高速发展导致了肥胖症患者在数量上的急剧上升，高脂血症与胆石症的发病率逐年增加，重症急性胰腺炎随之增多；与此同时，烧伤、车祸的发病率也相对较高；人均寿命延长，社会人口趋向于老龄化，脑血管病的发病率也逐年增加等等因素，使得危重病问题日趋突现。而SIRS是危重病病情加重的共同病理生理基础，本项目研究旨在探索抑制SIRS的新方法，因此对危重病的防治具有非常重要的意义。若达到

8、预期目标，将会提高危重病的抢救成功率，有助于家庭、社会的稳定，为浙江省可持续发展做出贡献。二、项目研究目标及与申请者研究工作长期目标的关系：本项目研究的目标有二个，其中一个是通过体外实验阐明1XA1对SIRS发生的各个环节是否有抑制作用：原发刺激因素（如PMA、PHA、内毒素等）对炎性细胞（中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞）的激活过程；激活后的炎性细胞释放细胞因子的过程；由细胞因子介导的炎性细胞的激活过程；激活后的炎性细胞对血管内皮细胞及组织的损伤过程。另一个是通过建立坏死性胰腺炎引发SIRS的大鼠模型，观察1XAd在动物体内抑制SIRS、保护脏器和治疗重症胰腺炎的作用机制。总目标是探索抑制SI

9、RS的新方法，为重症急性胰腺炎等危重病的治疗提供新思路，开辟新途径。重症急性胰腺炎作为一种良性疾病，病死率仍然高达10%30%（暴发性胰腺炎的病死率可达80%,甚至更高），这么高的病死率令人难以接受，还需要进行大量的研究工作以改善疗效。申请者主要从事重症胰腺炎的研究，长期的工作目标就是期望从根本上改变重症胰腺炎的疗效，提高治愈率、缩短住院时间和降低医疗费用。为达此目标，申请者在过去的十年时间内对重症胰腺炎的发病机理、病理生理以及治疗新途径等进行了一系列的研究,共主持8项省厅级科研项目，并通过2项省级科技成果鉴定，发表了有关重症胰腺炎的论著20余篇。从这一系列的研究工作中，我们认识到重症胰腺炎的

10、死因绝大多数与SIRS密切有关：在重症急性胰腺炎的早期，坏死的胰腺组织可导致SIRS,引起多脏器功能障碍综合征的第一次发病（死亡）高峰；在后期，感染的胰腺组织也可导致SIRS,引起多脏器功能障碍综合征的第二次发病（死亡）高峰。因此，若期望从根本上改变重症胰腺炎的疗效，必须深入研究SIRS的发生机理及探索SIRS治疗新手段，这对重症急性胰腺炎的治疗相当重要。本项目研究就是针对这一目标而进行，因此，它是实现申请者长期工作目标的一个重要环节，是这一系列研究工作的重要组成部分。三、项目研究内容，研究方案和进度安排口研究内容：体外实验：观察1XA4对中性粒细胞、单个核细胞激活的影响。在SIRS的发生过程

11、中，中性粒细胞、单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的激活起到非常重要的作用，是SIRS发生的启动点。故此，研究1XA4对中性粒细胞、单个核细胞激活是否具有抑制作用，意味着1XA1对S1RS的启动是否具有阻断作用。为此，我们在原发刺激因素（PMA、PHA、内毒素等）激活炎性细胞的过程中，采用1XA,干预与否，以及在不同时点（激活前和激活后）应用1XA,干预，然后测定各组炎症细胞的激活状态，以观察1XA,对炎症细胞激活过程的抑制作用及其作用环节。观察1XA4对中性粒细胞、单个核细胞激活后细胞因子释放的影响。炎症细胞激活以后会释放出来大量的细胞因子，而释放出来的细胞因子的浓度和SIRS的严重程度密切有

12、关。为研究1XA4对中性粒细胞、单个核细胞释放细胞因子的影响，我们采用上述方法激活二组炎性细胞，一组应用1XA4干预，另一组不应用1XA4干预，相同时间段后测定炎性细胞上清液中细胞因子浓度，以确定1XA4对激活后炎症细胞的细胞因子释放是否有抑制作用。观察1XA4对由细胞因子参与刺激激活炎性细胞的影响。在SIRS的发生过程中，激活炎性细胞释放出来的细胞因子反作用于炎性细胞导致激活，这种状况的存在使得SIRS进入恶性循环过程。为观察1XA4对这一恶性循环过程有无阻断作用，我们取激活状态的炎性细胞培养物的上清液（含大量细胞因子）与低浓度的激活剂共同刺激反应细胞（中性粒细胞、单个核细胞），然后加入1X

13、A,观察反应细胞对激活剂的敏感程度是否有所不同，从而判断1XA,是否能抑制细胞因子参与刺激激活炎性细胞的过程。观察1XA,对激活后炎症细胞介导组织器官损伤的保护作用。SIRS可导致各器官的损伤，引起多脏器功能不全，这是致死的主要原因。为了解1XA对损伤的脏器是否有保护作用及其作用机制，我们设计激活的中性粒细胞、单个核细胞与内皮细胞共同抚育，观察激活以后的炎性细胞对内皮细胞的黏附、损伤过程；以及采用1XA干预能否抑制这一损伤过程；并主要探讨1XA4保护脏器的机制是通过抑制炎症细胞的损伤能力，还是通过提高内皮细胞的抗损伤能力而得以实现。通过建立坏死性胰腺炎诱发S1RS大鼠模型了解1XA4在动物体内

14、对SIRS的抑制以及对重症胰腺炎的治疗作用和机制。上述内容研究了1XA,抑制SIRS的体外机制和作用环节，但在体内的作用如何尚不得而知。考虑到重症急性胰腺炎是危重病的典型代表，发生SIRS的机会较多，而SIRS又是胰腺炎致死的最主要病理生理基础。为此，我们设计坏死性胰腺炎诱发SIRS的模型作为研究对象来观察1XA,在动物体内的作用，通过检测组织病变程度、细胞因子的变化以及炎症细胞的活化状态等指标来分析1XAt在动物体内对S1RS的抑制作用和对重症胰腺炎的治疗作用及其机制。口研究方案和技术路线：第一部分（体外实验）：1XA,对原发刺激激活中性粒细胞、单个核细胞的影响。1XA4对激活后的中性粒细胞

15、、单个核细胞分泌细胞因子的影响。测定上清液IFN丫、aTNF、I16等细胞因子浓度，观察细胞因子分泌情况。1XA4对细胞因子参与刺激激活中性粒细胞、单个核细胞过程的影响。观察1XA4对激活后炎症细胞介导组织器官损伤作用的抑制，并探讨1XA,对脏器保护作用机制关于分组的说明：D组2、组4、组6应用1XA4而组1、组3、组5不应用1XA*2）组1、组2、组5、组6加入1PS激活内皮细胞，而组3、组4没应用1PS激活；3）组1、组2加入未激活中性粒细胞，而组3、组4、组5、组6加入激活的中性粒细胞。分组能说明的问题：D组1和组2的比较可以了解1XA&对1PS激活的内皮细胞是否有保护作用。2）组3和组4的比较可以了解1XA4对激活中性粒细胞的损伤作用是否有抑制作用。3）组5和组6的比较可以了解在内皮细胞和中性粒细胞同时被激活的情况下1XA的保护作用。第二部分：通过建立坏死性胰腺炎诱发SIRS大鼠模型了解1XA4在动物体内对S1RS的抑制及重症胰腺炎的治疗作用，并探讨其作用机制。通过杀伤实验和四哇氮蓝实验检测观察细胞的激活程度。检测细胞因子的产生，作为观察SIRS的一个指标。观察各器