化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法.docx

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1、团体标准标准编号：化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布XXXX发布前言3化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法41 .范围42 定义43 .规范性引用文件44 .检测原理45 .实验材料与试剂45.1.材料45.2.试剂45.3.对照品错误!未定义书签。6 .实验仪器与设备57 .实验步骤57.1.实验准备57.2.样品处理57.3.对照组溶液57 .4.实验方法68 .结果计算69 .质量控制7前百本标准按照GB/T1.1-2023给出规则起草。本标准提出和归口：本标准起草单位：本标准主要起草人：化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法1 .范

2、围本标准规定了化妆品温和刺激性检测斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准备、实验方法、实验结果和实验报告。本标准适用于评价液态水基类化妆品原料及其产品温和刺激性检测。2 .定义hourspost-ferti1ization（hpf）：受精后小时数3 .规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。化妆品安全技术规范（2015版）4 .检测原理受试样品配置成溶液孵育鱼胚至24h,在体式显微镜下观察并记录（拍照和视频）鱼胚的摆动次数、鱼胚死亡（凝结）数量。5 .实验材料与试剂5.

3、1. 材料5.1.1. 斑马鱼交配盒5.1.2. 鱼胚收集器5.1.3. 细胞培养板：6孔细胞培养板5.2. 试剂521 .十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（5mgm1）：称取十二烷基硫酸钠（SDS）标准品50mg（精确至0.01mg）,用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至IOm1容量瓶，于4保存。522 .十二烷基硫酸钠(SDS)标准储备溶液(1mgm1)：称取十二烷基硫酸钠(SDS)标准品IOmg(精确至0.01mg),用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至IOm1容量瓶，于4保存。523 3十二烷基硫酸钠(SDS)标准储备溶液(0.1mgm1)：称取十二烷基硫酸钠(SDS)标准品1mg(精确至0.

4、0Img),用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至Iom1容量瓶，于4保存。6 .实验仪器与设备6.1. 斑马鱼养殖系统62连续变倍体式显微镜(带拍照功能)63恒温培养箱6.4. 天平：精密度0.000OIg65软件：SPSS统计分析软件7 .实验步骤7.1. 实验准备7.1.1. 鱼胚品系：野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎；7.1.2. 鱼胚要求：以斑马鱼开始交配受精为OhPf,选用4656hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验；7.1.3. 胚胎刺激反应的表现形式为：刺激摆动，死亡(凝结)等。713鱼胚孵育温度:281；7.2. 样品处理721.水溶性样品：使用斑马鱼系统养殖水将受试样品稀释成

5、0.01、0.1、1、10、I(M)%实验浓度，混匀，放置4保存备用。7.3. 对照组溶液731空白对照组：斑马鱼系统养殖水7.32阳性对照组：十二烷基硫酸钠(SDS)标准储备溶液(5、1和O.1mg/m1）7.4. 实验方法随机挑选4656hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验。使用6孔细胞培养板为实验载体，每孔加入鱼胚20枚，实验溶液5m1。另设空白对照和阳性对照组，每个浓度设置3个平行组。在体式显微镜下观察，并记录鱼胚的刺激摆动，死亡（凝结）数量。8 .结果计算8.1. 统计并计算鱼胚的刺激摆动，死亡（凝结）数量。跟据终点反应对刺激性等级进行评分分类。终点反应终点评分刺激性分类评价指

6、标鱼胚（死亡或凝结率）和/或（摆尾次数）（D和/或W）-无刺激性D=0.0%;DV50%与空白对照组无显著性差异；W空白对照组且与空白对照组无显著性差异+轻微刺激性DV50%（与空白对照组有显著性差异）；W50%（与D=50%组无显著性差异）；W与空白对照/阳性对照相比有显著性差异+中度刺激性D=50.0%;D50%（与阳性对照组有显著性差异）；W与空白对照组/阳性对照相比有显著性差异+强刺激性D=100.0%;D50%（与阳性对照组无显著性差异）；W与空白对照/阳性对照相比有显著性差异8.2. 使用SPSS统计分析软件进行统计分析。9 .质量控制9.1. 基本原则：测试中设置的对照检测应符合以下情况，如出现非下述标准,则视为质控不合格。9.2. 根据计算结果，空白对照组应为无刺激性，说明实验结果有效。