TBDNA样本处理(2).docx

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1、TB-DNA样本处理标准操作规程1 .目的规范结核分枝杆菌(TB)DNA定性检测的样本制备操作。2 .范围TB-DNA定性检测实验的样本制备、核酸提取。3 .操作人员PCR室在岗工作人员。4 .操作步骤4. 1打开金属浴，调至37；4.2从传递窗中取出PCR反应液管、阴性对照、阳性对照、DNA提取液。PCR反应液管立即放入样本准备区4C冰箱。4.3将阴、阳性对照置37金属浴中复融，复融后振荡混匀，低速离心600OrPm5秒，使管盖不沾带试剂。4.4样本处理4.4.1痰液标本处理：合格的痰液标本中加入3倍体积的4%NaOH,混匀，室温放置30分钟以上液化。4.4.2取Im1液化痰于1.5m1离心

2、管中13,OOOrpm离心10分钟，弃上清。在沉淀中加入In11无菌生理盐水，混匀，13,00OrPn1离心5分钟，弃上清。重复上述洗涤步骤一次。4.4.3沉淀中加入501DNA提取液，振荡混匀后瞬时低速离心，100金属浴10分钟。(温浴时密切观察反应管，一旦崩管要立即取出盖上，用次氯酸钠溶液擦拭金属浴盖子，并在实验结束后近紫外灯照射至少4小时。)4. 4.4温浴10分钟后取出反应管，13,00OrPm离心5分钟备用。4.5 阴性对照、阳性对照的处理：取出5U1对照品，在对照品中加入DNA提取液50u1,震荡混匀，Io(TC沸水浴10分钟，13,00OrPn1离心5分钟备用。4.6 加样：从4

3、冰箱中取出已配制分装好的PCR反应液，每管分别加入处理好的待测标本、阴性对照、阳性对照上清液各51,盖紧管盖，瞬时低速离心。4.7 离心后取出反应管传至样本准备区到PCR扩增区的传递窗中。4.8 表5. 1PCR室工作流程记录表123456I789101112A阳年:讣6IBPG心讥XC向mWyID小2诏次EY1CVFG,-HPCR室流程记录表编号：JYK-PCR-TAB-002PCR室工作流程记录表4检验日期e7?.咯操作者幺如M审核者彳豺实验前准备，r-J打开通风设备臼/增仪、加样器、温湿度计在校准宥效期内W试剂在有效期内B毒液新鲜配制试剂准备区实验前：0上试剂准备区打开空调口Z实验台面清

4、洁（水或70%酒精擦拭）冰箱温度：冷藏室（2-8C）上P冷冻室（-182,C）-C冰柜温度：冷眄冥（2-8C）早eC冷冻室（-182C）c-C实验室温度：X又（允许范围：】0-3（TC）相对湿度：琦%（允许范围：30%-70%）检测项目：7a-mw试剂来源:厦门泰普批号:走山1乐浓验用捻M.份利余量：J4-$检测项目：试剂来源：厦门泰普批号:次试验用量：份剩余量：叁实验后：口清洁实验台面、加样器，定期清洁地面口按标准操作程序处理废弃物样本准备区实验前：O关上样本区门并打开空调sD实验台面及仪器设备表面清洁冰箱温度：冷藏室（2-8C）竿-C冷冻室（-182C）-C实验室温度：KC（允淬岳圉：10-30C）相对湿度：/X%（允许范围：30%-70%）核酸提取：Q按PCR实验室标准操作规程对样本进行核酸提取仪器设备使用：生物安全柜：目正常口异常离心机1口正常口异常离心机2H1正常异常恒温金属浴D正常异常强力振荡器口正常异常/漩涡混合器Q4E常口异常-g检测项目阴性质控物来源：试剂盒批号:3血3阳性质控物来澹：幽念批号：X曲/”本实验处理的了巳检测项目样本唯一编号及拟扩增位置,产