2015年版《中国药典》通则0721 维生素A测定法通则.docx

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1、0721维生素A测定法本法是用紫外-可见分光光度法（通则0401）或高效液相色谱法（通则0512）测定维生素A及其制剂中维生素A的含量，以单位表示,每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344g或全反式维生素A醇0.300go测定应在半暗室中尽快进行。第一法（紫外-可见分光光度法）由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。在以下规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长

2、应准确，在测定前，应对仪器波长进行校正。测定法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每ImI中含915单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）,测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的（E陵）值。波长nm吸光度比值1波长nm吸光度比值3000.5553400.8113160.9073600.2993281.000如果吸收峰波长在326329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的0.02,可用下式计算含量：每Ig供试品中含有的维生素A的单位=（E怂）（328nm）1900如果吸收波长在32

3、6329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的0.02,应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：4328（校正）=3.52（2A321-A3K-A340）如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过3.0%,则不用校正，仍以未经校正的吸光度计算含量。如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一15%至一3%之间，则以校正吸光度计算含量。如果校正吸光度超出未校正吸光度的一15%至一3%的范围，或者吸收峰波长不在326329nm之间，则供试品须按下述方法测定。另精密称取供试品适量（约相当于维生素A总量500单位以上，重量不多于2g）,置皂化瓶中，加乙醇30m1与50%氢氧化钾溶

4、液3m1,置水浴中煮沸回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水IOnd冲洗冷凝管内部管壁，将皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂），皂化瓶用水60IOOmI分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醛振摇提取4次，每次振摇约5分钟，第一次60m1,以后各次40m1,合并乙酸液，用水洗涤数次，每次约IOOn11,洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇粉酬指示液不再显红色，乙酸液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的施器渡过，滤器用乙酸洗涤，洗液与乙醛液合并,置25OnII量瓶中，用乙醛稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，置蒸发皿内，微温挥去乙酸，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每Im1中含维生

5、素A915单位,照紫外-可见分光光度法（通则0401），在300nm31Onm、325nm与334nm四个波长处测定吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323327nm之间，且30Onn1波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73,按下式计算校正吸光度：A32s（校正）=6.815A3t52.555A304.26OA934每Ig供试品中含有的维生素A的单位;器）（325nm,校正）1830如果校正吸光度在未校正吸光度的97%103%之间，则仍以未经校正的吸光度计算含量。如果吸收峰的波长不在323327nm之间，或300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比

6、值超过0.73,则应自上述皂化后的乙酸提取液25Om1中，另精密量取适量（相当于维生素A300400单位），微温挥去乙健至约剩5m1,再在氮气流下吹干，立即精密加入甲醇3m1,溶解后，采用维生素D测定法（通则0722）第二法项下的净化用色谱系统，精密量取溶解后溶液5001,注入液相色谱仪，分离并准确收集含有维生素A的流出液，在氮气流下吹干，而后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解”起，依法操作并计算含量。第二法（高效液相色谱法）本法适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；以正己烷-异丙醇（997：3）为流动相；检测波长为325nm取系统适用性试验

7、溶液IOH1注入液相色谱仪，调整色谱系统，维生素A醋酸酯峰与其顺式异构体峰的分离度应大于3.0。精密量取对照品溶液10口1,注入液相色谱仪，连续进样5次，主成分峰面积的相对标准偏差不得过3.0%。系统适用性试验溶液的制备取维生素A对照品适量（约相当于维生素A醋酸酯300mg）,置烧杯中，加入碘试液0.2m1,混匀，放置约10分钟，定量转移至20On11量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，精密量取I1n1置IOOm1量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀。测定法精密称取供试品适量（约相当于15mg维生素A醋酸酯），置IOomI量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，精密量取5m1,置50d量瓶中，用正己烷稀释

8、至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取维生素A对照品适量，同法制成对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10口1,分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。【附注】（1）甘油淀粉润滑剂取甘油22g,加入可溶性淀粉9g,加热至140C,保持30分钟并不断搅拌，放冷，即得。（2）不含过氧化物的乙醛照麻醉乙醛项下的过氧化物检查，如不符合规定，可用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醛层，再用水振摇洗涤1次，重蒸，弃去首尾5%部分,播出的乙醛再检查过氧化物，应符合规定。(3)若维生素A对照品中含有维生素A醋酸酯顺式异构体，则可直接以对照品溶液作为系统适用性溶液，不必再做破坏性实验。