阿胶检验操作规程（依据2023版药典）.docx

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1、阿胶检验操作规程（依据2023版药典）【性状】本品呈长方形块、方形块或丁状。棕色至黑褐色，有光泽。质硬而脆，断面光亮，碎片对光照视呈棕色半透明状。气微，味微甘。【鉴别】取本品粉末0.1g,加1%碳酸氢镂溶液50m1,超声处理30分钟，用微孔滤膜滤过，取续滤液IOOU1,置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液IOU1（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢镂溶液制成每Im1中含InIg的溶液，临用时配制），摇匀，37恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材01g,同法制成对照药材溶液。照（含量测定）特征多肽项下色谱、质谱条件试验，选择质荷比（mz）539.8（双电荷）-612.4和mz539.8（

2、双电荷）-923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5u1,按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1o吸取供试品溶液5口1,注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（mz）539.8（双电荷）-612.4和mz539.8（双电荷）-923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。【检查】水分取本品1g,精密称定，加水2m1,加热溶解后，置水浴上蒸干，使厚度不超过2mm,照水分测定法（通则0832第二法）测定，不得过15.0%o重金属及有害元素照铅、镉、碑、汞、铜测定法（通则2321原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测

3、定，铅不得过5mgkg;镉不得过0.3mgkg;碑不得过2mgkg,汞不得过0.2mgkg,铜不得过20mgkgo水不溶物取本品1Og,精密称定，加水5d,加热使溶解，转移至已恒重IomI具塞离心管中，用温水5m1分3次洗涤，洗液并入离心管中，摇匀。置40C水浴保温15分钟，离心（转速为每分钟2000转）10分钟，去除管壁浮油，倾去上清液，沿管壁加入温水至刻度，离心，如法清洗3次，倾去上清液，离心管在105C加热2小时，取出，置干燥器中冷却30分钟，精密称定，计算，即得。本品水不溶物不得过2.0%其他应符合胶剂项下有关的各项规定（通则0184）。【含量测定】氨基酸照高效液相色谱法（通则0512

4、）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-0.InIoI/1醋酸钠溶液（用醋酸调节PH值至6.5）（7:93）为流动相A,以乙月青-水（4:1）为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm;柱温为43。理论板数按1-羟脯氨酸峰计算应不低于4000。时间（分钟）流动相A（）流动相B（）0-11100-930-711-13.9937877213.9-1488-8512-1514*-2985-66153429-30660341OO对照品溶液的制备取1-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、1-脯氨酸对照品适量，精密称定，加O.1mo11盐酸溶液制成

5、每ImI分别含1-羟脯氨酸80g、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70g、1-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约0.25g,精密称定，置25m1量瓶中，加0.1mo11盐酸溶液20m1,超声处理（功率500W,频率40kHz）30分钟，放冷，加0.1mo1/1盐酸溶液至刻度，摇匀。精密量取2m1,置5m1安甑中，加盐酸2m1,150C水解1小时，放冷，移至蒸发皿中，用水IOm1分次洗涤，洗液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mo1/1盐酸溶液溶解，转移至25m1量瓶中，加01mo1/1盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5m1,分别置25m1量

6、瓶中，各加0.1Ino1/1异硫氢酸苯酯（P1Te）的乙懵溶液2.5m1ImoI/1三乙胺的乙曙溶液2.5m1,摇匀，室温放置1小时后，加50%乙睛至刻度，摇匀。取Ionn,加正己烷Ion11,振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取衍生化后的对照品溶液与供试品溶液各51,注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含1-羟脯氨酸不得少于8.0%,甘氨酸不得少于18.0%,丙氨酸不得少于7.0%,1-脯氨酸不得少于10.0%。特征多肽照高效液相色谱-质谱法（通则0512和通则0431）测定。色谱、质谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内

7、径2.1mm）；以乙盾为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。时间分仲）流动相A（）流动相H（%）02552O95-8025-402O5O80-50采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化（ES1）正离子模式下多反应监测（MRM）,监测离子对见下表：测定成分定离子对m.z定性离子时m/驴椰多肽1469.25（双电荷）469.25（双电荷）712.30783.40犷源多MAB618.35（双电荷）618.35双电荷）-779.40-*850.40理论板数按驴源多肽A1峰计算应不低于4000o对照品溶液的制备取驴源多肽A1对照品、驴源多肽A?对照

8、品适量，精密称定，加1%碳酸氢镂溶液分别制成每In1I含2.5Ug的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末0.1g,精密称定，置50m1量瓶中，加1%碳酸氢镂溶液40m1,超声处理（功率250W,频率40kHz）30分钟，加1%碳酸氢钱溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取IinI至5m1量瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢钱溶液制成每InI1中含Img的溶液，临用前新制）1m1,加1%碳酸氢镂溶液稀释至刻度，摇匀，37恒温酶解12小时，滤过，取续滤液，即得。测定法精密量取对照品溶液1m1、2m1、5m1、10m1.20m1和25m1,分别置50m1量瓶中，加1%碳酸氢镂溶液稀释至刻度，制成标准曲线溶液。分别精密吸取不同浓度的标准曲线溶液与供试品溶液各51,注入高效液相色谱-质谱联用仪，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标制备标准曲线。从标准曲线读出供试品溶液中相当于驴源多肽A1和驴源多肽A?的量，计算即得。本品按干燥品计算，含特征多肽以驴源多肽A1（C41H68N12O13）和驴源多肽A2（C51H82N18O18）的总量计应不得少于0.15%o